细胞培养过程中的结晶

三人禾212 · 发表于 2023-4-10 13:30:24

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细胞培养的大佬们，请问细胞培养过程中的结晶是怎么引起的？

谦受益93 · 发表于 2023-4-10 14:45:42

细胞培养过程中的结晶？结晶在哪里？我没遇到过

davidzjy · 发表于 2023-4-11 09:20:35

本帖最后由 davidzjy 于 2023-4-11 09:26 编辑

有照片吗通过显微镜下结晶的形态可以帮助分析成分
细胞培养可能出现的结晶主要有草酸钙、氨基酸/蛋白质、磷酸盐等
另1 pH变化是很多结晶形成的关键因素拍下培养基的颜色或者直接检测pH值有助于troubleshooting
另2 有些培养基本身就是高糖/高离子的（如alphaMEM）这类培养基会更容易出现结晶

Trocy-zizi · 发表于 2023-4-11 16:30:26

问题相符，我借楼提问一下：

尚恩生物 293[HEK 293](人胚肾细胞)细胞培养教程中的“细胞复苏”攻略中描述：融化至米粒大小冰块，终止水浴，避免过度水浴或水浴时间不足。

第一次看到这种描述，请问各位老师，这个方法异于常说的“速融法”，请问为什么这个细胞却可以用这个方法，保留冰块呢？不会涉及冰晶损伤？

三人禾212 · 发表于 2023-4-12 16:31:35

davidzjy 发表于 2023-4-11 09:20
有照片吗通过显微镜下结晶的形态可以帮助分析成分
细胞培养可能出现的结晶主要有草酸钙、氨基酸/蛋白质、 ...

有照片，不知道怎么上传，我给您发过去。以前没出现过这种情况，这是第一次见

davidzjy · 发表于 2023-4-14 08:46:54

三人禾212 发表于 2023-4-12 16:31
有照片，不知道怎么上传，我给您发过去。以前没出现过这种情况，这是第一次见

在帖子里添加附件就行了或者传到网盘上发链接

姣妹崽 · 发表于 2023-4-14 09:09:59

三人禾212 发表于 2023-4-12 16:31
有照片，不知道怎么上传，我给您发过去。以前没出现过这种情况，这是第一次见

回复框右上角有个高级模式，发帖的时候编辑框上也有高级模式、图片或者附件图标点进去都可以

davidzjy · 发表于 2023-4-15 09:55:32

本帖最后由 davidzjy 于 2023-4-15 10:00 编辑

Trocy-zizi 发表于 2023-4-11 16:30
问题相符，我借楼提问一下：

尚恩生物 293[HEK 293](人胚肾细胞)细胞培养教程中的“细胞复苏”攻略中描 ...

水浴不足显然增加了冰晶损伤就不细说了
过度水浴的伤害主要是考虑冻存液（尤其是DMSO）其实对活细胞是有一定毒性的所以要尽快离心去除其影响
“米粒”这块其实不难理解就是一个系统热量平衡的问题——快速升温的过程中液体/冰块核心和外部（贴近容器内壁的部分）之间的温差可能很大
当液体内部的冰晶很小的时候外侧先融化的部分可能已经达到/接近外部水浴的温度了
这时停止水浴管内总的热量其实是足以使全部冰晶融化的只是需要轻微震荡甚至等待自然地热扩散达到热量平衡就行了

三人禾212 · 发表于 2023-4-24 17:02:07

davidzjy 发表于 2023-4-14 08:46
在帖子里添加附件就行了或者传到网盘上发链接

照片已经上传

三人禾212 · 发表于 2023-4-24 17:03:23

姣妹崽发表于 2023-4-14 09:09
回复框右上角有个高级模式，发帖的时候编辑框上也有高级模式、图片或者附件图标点进去都可以

谢谢，已经按照你的回复上传照片了

三人禾212 · 发表于 2023-4-24 17:08:51

Trocy-zizi 发表于 2023-4-11 16:30
问题相符，我借楼提问一下：

尚恩生物 293[HEK 293](人胚肾细胞)细胞培养教程中的“细胞复苏”攻略中描 ...

“速溶法”是说短时间之内将细胞进行复苏，时间太长的话，冻存液中的物质会损伤细胞；融化至米粒大小其实也是为了缩短水浴复苏的时间……

davidzjy · 发表于 2023-4-26 09:15:59

三人禾212 发表于 2023-4-24 17:02
照片已经上传

形态上看起来是正八面体样的草酸钙结晶
可能导致的原因有很多需要细节信息
比如培养基和血清等试剂有没有换新批次（血清存在结晶的概率高、培养基没充分溶解且未经抽滤）、培养基具体是什么（像上面说的有些培养基本身高盐看能不能换成类似RPMI1640）、是否有额外添加的物质（包括某些冻存保护剂如硫代甘油）、培养箱水盆是不是干了（水分挥发导致浓度升高）、细胞代谢产物累积、pH变化程度
也有很多可以用来排查的方法比如把各种试剂（培养基、血清等）单独放置在培养箱内进行观察、检测pH、将有结晶的老培养基倒出来进行实验（如加盐酸、醋酸、氢氧化钠）等等太多的可能性

三人禾212 · 发表于 2023-4-27 12:01:35

davidzjy 发表于 2023-4-26 09:15
形态上看起来是正八面体样的草酸钙结晶
可能导致的原因有很多需要细节信息
比如培养基和血清等试剂有 ...

请问会不会和培养基放置时间长短有关系？

davidzjy · 发表于 2023-4-27 22:00:42

三人禾212 发表于 2023-4-27 12:01
请问会不会和培养基放置时间长短有关系？

不是没有可能液体状态保存时间长会有一些成分分解降解物质的影响不好评估
最简单排除办法就是做一些对照更换一些试剂和条件看是否还会出现结晶现象甚至可以用同样的培养基养其他细胞试试

三人禾212 · 发表于 2023-5-6 15:56:59

davidzjy 发表于 2023-4-27 22:00
不是没有可能液体状态保存时间长会有一些成分分解降解物质的影响不好评估
最简单排除办法就是做一些对 ...

好的，很感谢耐心的回复！

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