请问使用超净工作台做无菌检测是否能双人同时进行？

小毛驴09

用类似图中的垂直层流的超净工作台，进行医疗器械无菌检测，两个人同时使用两个酒精灯同时操作，分别进行不同批的样品的无菌检查，两个人互相不产生碰撞，台面挺大的，会不会对无菌结果有影响，造成假阳性呢？ps：在各项环境检测工作都到位的情况下，如3个监测平板，阴性对照，空白对照，时不时喷酒精等。最近无菌出问题了，在查找原因，有老师说可能是由于双人操作，影响了超净工作台的气流，不知是否是真的。

woshini2ge

在各项环境检测工作都到位的情况下，双人同时在超净工作台进行不同批样品的无菌检查，且互相不产生碰撞，对无菌结果产生影响造成假阳性的可能性不大。
排查建议
除了考虑双人操作因素外，还应该进一步排查其他可能的原因，如样品本身是否存在污染、操作过程中的其他细节（例如样品的转移方式、检测试剂的有效性等）、超净工作台的设备性能（如 HEPA 过滤器是否需要更换等）。

小毛驴09

图片在这里，第一楼没传上去，第一次发帖，见谅

八档丶电风扇

做气流流型动态测试、证明双人操作不会影响垂直气流、双方操作不会互相影响，结合环境检测结果做个说明或者评估就好了

小毛驴09

woshini2ge 发表于 2024-10-11 11:28
在各项环境检测工作都到位的情况下，双人同时在超净工作台进行不同批样品的无菌检查，且互相不产生碰撞，对 ...

谢谢老师，我再详细请教一下：1.样品采用环氧乙烷灭菌，同步放置的环氧乙烷生物指示剂检测已无菌，但样品仍出现1-2个阳性（样品20片），并且在连续4批次都有这种情况，（生物负载不超过100cfu/每个样品），样品本身有可能存在污染吗？
2.操作过程中，我们是直接将样品用镊子从最小包装中夹出，直接投入到试管中，试管口事先已经用酒精灯灼烧，镊子剪刀已灭菌。检测试剂的空白无菌，灵敏度通过。
3.超净工作台买来5年，没有更换过任何过滤器，但风速和尘埃粒子、沉降菌浮游菌都是合格的。
以上或除此之外是否还有我们没有注意到的细节，产生问题呢？

小毛驴09

八档丶电风扇 发表于 2024-10-11 11:30
做气流流型动态测试、证明双人操作不会影响垂直气流、双方操作不会互相影响，结合环境检测结果做个说明或者 ...

嗯嗯，这个测试好像需要专门测气流的仪器，我们公司没有，而且估计不会花钱做

woshini2ge

一、关于样品污染的可能性
环氧乙烷灭菌与生物指示剂结果分析
环氧乙烷生物指示剂检测已无菌，但样品仍有阳性结果，这种情况可能存在多种原因。虽然生物指示剂表明灭菌过程理论上达到了灭菌效果，但不能完全排除样品本身特殊结构或成分对灭菌效果的干扰。
样品本身存在污染是有可能的。即使生物负载不超过 100cfu / 每个样品，可能存在一些微生物在灭菌过程中形成了特殊的抗性结构（如芽孢），而环氧乙烷对这些结构的灭菌效果可能受到样品结构、成分等因素影响。例如，如果样品内部存在一些封闭的微小空间，微生物可能在其中受到一定的保护，导致灭菌不完全。
连续批次出现阳性结果的分析
连续 4 批次都出现这种情况，增加了样品本身存在问题的可能性。可能是样品生产过程中的某个环节引入了具有特殊抗性的微生物，或者是样品的包装方式不利于环氧乙烷的充分渗透。
二、操作过程中的潜在问题
镊子夹取样品操作分析
直接用镊子从最小包装中夹出样品投入试管的操作，虽然试管口事先灼烧且镊子剪刀已灭菌，但在夹取过程中可能存在一些潜在风险。
如果镊子在夹取过程中接触到包装的外部（即使是很小的接触），可能会将外部的微生物带入试管。而且，在夹取时可能会对样品表面造成微小的损伤，使得内部可能存在的微生物暴露出来，从而影响检测结果。
操作过程中的其他风险
在从最小包装中取出样品到投入试管的过程中，样品暴露在环境中的时间长短也可能是一个因素。如果暴露时间过长，即使在超净工作台内，也可能有微生物重新污染样品的风险。
三、超净工作台相关问题
超净工作台设备状况分析
超净工作台买来 5 年未更换过滤器，尽管风速、尘埃粒子、沉降菌和浮游菌都是合格的，但这并不代表过滤器的过滤效率仍然处于最佳状态。
随着时间的推移，过滤器可能会出现微小的破损或者过滤效率下降，可能会有一些微生物穿透过滤器进入操作区域，对样品造成污染。
四、其他可能被忽视的细节
检测试剂保存与使用
虽然检测试剂的空白无菌且灵敏度通过，但检测试剂的保存条件是否严格按照要求执行需要进一步确认。如果检测试剂在保存过程中受到温度、光照等因素的影响，可能会影响其对微生物的检测能力。
环境因素
除了超净工作台内的环境，实验室整体的温湿度等环境因素也可能对检测结果产生影响。例如，某些微生物在特定的温湿度条件下可能更易生长或形成特殊的抗性结构。
实验室的清洁消毒程序是否严格执行也需要排查。如果实验室的墙壁、地面等存在微生物滋生的情况，可能会间接影响超净工作台内的操作。

机智鼠

在超净工作台中进行无菌检测时，双人同时操作确实可能对气流产生影响，从而影响无菌检测结果。根据《药品生产质量管理规范》（GMP）及《医疗器械生产质量管理规范》（YY/T 0287-2017），无菌检测应在符合要求的洁净环境中进行，确保无菌检测结果的准确性。

在使用垂直层流的超净工作台时，双人同时操作可能会干扰到工作台内部的气流分布，导致空气中的微生物沉积在样品表面，从而产生假阳性结果。因此，建议在进行无菌检测时，尽量遵循单人操作的原则，以减少人为因素对检测结果的影响。

当然，如果实际操作中确实需要双人同时操作，可以采取以下措施来降低风险：

1. 确保两人之间的操作距离足够远，避免相互干扰；
2. 使用两个独立的酒精灯，分别进行不同批次样品的无菌检查；
3. 定期对超净工作台进行维护和检查，确保其性能稳定；
4. 加强环境监测，如增加监测平板数量、阴性对照和空白对照等，以确保检测结果的准确性。

总之，在保证各项环境检测工作到位的前提下，尽量避免双人同时操作超净工作台进行无菌检测，以降低假阳性结果的风险。如有特殊情况，需采取相应措施确保检测结果的准确性。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

迷之久远

小毛驴09 发表于 2024-10-11 11:41
谢谢老师，我再详细请教一下：1.样品采用环氧乙烷灭菌，同步放置的环氧乙烷生物指示剂检测已无菌，但样品 ...

空白无菌，产品有菌，就是灭菌出问题了。如果你们不确定，可以通过湿热或辐照产品，同法操作做对照，原产品有菌，湿热或辐照产品无菌，那就确证了。