时间分辨荧光免疫分析法原理及应用

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时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA)是目前与化学发光、电化学发光并驾齐驱的三种超敏免疫分析方法之一，而时间分辨荧光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)是时间分辨荧光免疫分析法的关键组成部分。

上海伊普瑞生物科技有限公司可提供该种具有特殊功能的时间分辨荧光微球，此种荧光微球表面修饰有合适密度的羧基功能基团，它可以用于与抗体或蛋白的共价偶联，提高了标记物的稳定性。更重要的是该种微球经稀土镧系螯合物铕染色而得，稀土铕染料填充在微球内部，可有效避染料的渗漏，同时保持微球表面的免疫反应性，从根本上解决了传统的DELFIA法只能在液相中而不能在固相界面反应的问题，从而解决了将时间分辨荧光微球应用于免疫层析平台的瓶颈。由于不易受光漂白作用和其他环境因子的影响，因此该产品可室温下稳定储存很久。相比其他荧光基团，稀土镧系螯合物具有更长的荧光寿命，且具有更长的stokes位移，因此测量时，通过延缓测量时间，有助于避免非特异性荧光干扰，提高检测灵敏度。

时间分辨荧光免疫分析法原理：

在时间分辨荧光免疫分析法中，通过测量与蛋白质结合的标签发出的光来观察高度特异性的抗原-抗体结合反应。与蛋白质结合的标签是镧系离子的稳定配合物（主要是 EuIII 、TbIII和 SmIII）。此外， 由于镧系离子在水溶液中是作为无机盐的弱发射体，它的发射光具有Stokes位移大、容易被过滤、带宽窄等金属离子特点。镧系螯合物的发光量子产率很高，并且可以在一个延迟时间后进行荧光测量，在此期间，任何来自样品、仪器和分析试剂等的短寿命荧光都会衰减。三价稀土离子及其螯合物可代替同位素、化学发光物质和荧光物质，标记激素、核酸探针、抗原抗体等物质。当免疫反应发生后，根据荧光强度或相对荧光强度比值，即可检测反应体系中分析物的浓度，实现定量分析。镧系离子具有极长的发光寿命(μs到ms范围），相比之下，来自传统荧光染料和样品干扰的发光发生在纳秒级，这种特性意味着即使在存在其他发光 物质的情况下，也可以通过对信号进行时间门控来选择性地测量镧系元素的发光。就检测分析领域而言，时间分辨荧光免疫技术的好处是检测灵敏度很大程度上取决于可以实现的信号背景比。荧光测量的背景信号有包括样品试剂、环境因素等各种来源，然而这些干扰中的绝大多数都具有标准的短寿命荧光，可以通过时间门控检测过滤掉。镧系元素螯合物具有较大Stokes位移和窄发射带，且激发和发射光谱之间没有重叠，因此不易受背景信号的影响，是生化领域进行高灵敏度检测分析的理想候选者。

时间分辨荧光免疫分析法应用：

1.肿瘤学领域：TRFIA 在肿瘤早期诊断、预后评估及治疗监测方面作用显著。针对各类肿瘤特异性标志物，例如甲胎蛋白（AFP）用于肝癌筛查、癌胚抗原（CEA）辅助诊断结直肠癌、糖类抗原 125（CA125）监测卵巢癌进展等，凭借其能够精准定量极低浓度生物标志物的能力，为肿瘤的分期、治疗决策制定及复发预判提供关键的量化依据，帮助临床医生实现肿瘤的个体化精准诊疗。

2.心血管疾病诊疗：在急性心肌梗死、心力衰竭等心血管疾患的诊断流程中，TRFIA 可精确测定心肌肌钙蛋白 I（cTnI）、肌红蛋白（Mb）以及 N 端脑钠肽前体（NT-proBNP）等关键指标。这些指标的动态变化监测，对于及时确诊病情、评估心肌损伤程度以及预测疾病的转归具有不可替代的作用，推动心血管疾病诊疗的精准化。

3.自身免疫性疾病管理：对于系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）等自身免疫性疾病，TRFIA 可对疾病特异性自身抗体，如抗双链 DNA 抗体（抗 - dsDNA）、抗环瓜氨酸肽抗体（抗 - CCP）等进行高精度定量检测。通过监测这些抗体水平的波动，结合患者临床症状及其他实验室检查，医生能够精准判断疾病的活动状态，优化治疗方案，提高患者生活质量。

4.化学残留监测：在农产品、畜产品以及加工食品领域，TRFIA 对兽药残留（如四环素类、磺胺类、喹诺酮类）和农药残留（如有机磷、拟除虫菊酯类）的检测具有明显的优势。凭借其高灵敏度，能够在极低浓度下准确甄别残留物质，防止超标食品流入市场，切实保障消费者的饮食健康。

5.生物毒素防控：针对黄曲霉毒素、呕吐毒素等食品中常见的生物毒素，TRFIA 能够快速、精准地完成定量检测。通过把控食品加工原料、半成品及成品中的毒素含量，有效降低消费者因食用毒素污染食品而遭受健康损害的风险。

6.细胞与分子生物学探究：在细胞生物学研究中，TRFIA 用于定量分析细胞内各种信号转导蛋白、转录因子等关键蛋白质的表达情况。通过监测这些蛋白质在细胞生长、分化、凋亡等不同阶段的动态变化，研究人员能够深入探究细胞的内在分子机制。

7.疾病发病机制研究领域：在医学基础研究领域，TRFIA 帮助研究人员深入剖析疾病的发病机制。以神经退行性疾病为例，通过检测疾病模型动物或细胞模型中相关蛋白质标志物的变化，如阿尔茨海默病中的 β- 淀粉样蛋白、帕金森病中的 α- 突触核蛋白等，科学家们能够逐步揭开疾病发生、发展的神秘面纱。

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