硫乙醇酸盐培养基应该在什么条件下培养

清露紫苏

昨天无意中发现《中国药典》三部无菌检查的直接接种法要求接种了供试品的硫乙醇酸盐培养基分别在30-35℃和20-25℃培养。但《中国药典》二部并无此要求，想请教各位老师，为什么三部要如此规定？

仲夏秋夜云

三部是生物制品……
有空你比较一下一部和二部的微生物检测……
为什么，我猜，因为……要求两种大类的微生物就培养，做一种温度是不完备的。

Mandy27ye

有同事也问了相同问题，我也如楼上猜了一下

lxiaof

三部是生物制品药典，微生物的风险更高，所以硫乙醇酸盐培养基使用两个温度培养。还需要注意的是三部无菌培养中培养温度是20-25度，30-35度；二部无菌培养温度是23-28度，30-35度。

清露紫苏

仲夏秋夜云 发表于 2014-2-28 09:42
三部是生物制品……
有空你比较一下一部和二部的微生物检测……
为什么，我猜，因为……要求两种大类的微 ...

我发帖之前比较了一下，一二部的无菌要求是一样的。只是三部的不一样。

清露紫苏

lxiaof 发表于 2014-2-28 11:44
三部是生物制品药典，微生物的风险更高，所以硫乙醇酸盐培养基使用两个温度培养。还需要注意的是三部无菌培 ...

谢谢提醒。
想再问一下，为什么三部的微生物风险更高，是由于有发酵产品吗？

lxiaof

因为生物制药产品很多是由微生物生产的，生产过程中是存在活体微生物的，所以生物制剂产品的无菌检查要求更高。

清露紫苏

lxiaof 发表于 2014-3-3 15:13
因为生物制药产品很多是由微生物生产的，生产过程中是存在活体微生物的，所以生物制剂产品的无菌检查要求更 ...

只是在三部无菌检查法的验证方法部分并未看到哪个菌种是用硫乙醇酸盐培养基接种却在20-25℃培养的，所以觉得挺奇怪的。请问有什么菌是在20-25℃的硫乙醇酸盐培养基中生长的？

清露紫苏

另外再看了一下三部药典，薄膜过滤法的操作跟二部也是不一样的。二部薄膜过滤法的供试品阳性是跟供试品管一起培养14天的，但三部的供试品阳性是在供试品管培养14天后再加菌液培养的。

lxiaof

三部的无菌阳性对照是有两种情况，一种是和二部一样，一种是培养14天后再加阳性对照。这是因为三部的生物制剂可能是每批样品数量很少且价格昂贵，如果取来做阳性对照不划算，所以牺牲时间了，就培养14天后再做。
真菌的生长温度比细菌生长温度有些会低一些，选择20-25度和30-35度，温度范围更大，选择面更广一些。
硫乙醇酸盐培养基是培养厌氧菌和好氧菌的，真菌和细菌都能在其中生长。

清露紫苏

lxiaof 发表于 2014-3-3 16:42
三部的无菌阳性对照是有两种情况，一种是和二部一样，一种是培养14天后再加阳性对照。这是因为三部的生物制 ...

那要是跟二部一样的话，需要一起过滤四个滤杯吗？两个硫乙醇酸盐的供试品样，一个硫乙醇酸盐的供试品阳性样，一个改良马丁的供试品样？

lxiaof

还得加上三个阴性对照，硫乙醇两个，改良马丁一个。所以每次实验得使用三套三联体无菌检查套筒。

清露紫苏

lxiaof 发表于 2014-3-5 09:59
还得加上三个阴性对照，硫乙醇两个，改良马丁一个。所以每次实验得使用三套三联体无菌检查套筒。

这种检查方式是否仅限于细菌发酵类产品，细胞培养的需要吗？

lxiaof

三部药典收录的均需按此检查

清露紫苏

lxiaof 发表于 2014-3-5 13:11
三部药典收录的均需按此检查

非常感谢！问题果然是越辩越明的。

lxiaof

清露紫苏 发表于 2014-3-5 15:18
非常感谢！问题果然是越辩越明的。

做三部药典要求的产品确实比二部复杂些，涉及实验更多。需要小心仔细。而且在工作中其实也需要使用二部药典附录的微生物限度检查法，水系统的微生物检测依据是二部微生物限度，而不是三部微生物限度。

jiang376

我们实验室有两个组 当时我分到的是三部的，写好文件才发现 跟人家的不一样 哎

清露紫苏

jiang376 发表于 2014-3-13 11:39
我们实验室有两个组 当时我分到的是三部的，写好文件才发现 跟人家的不一样 哎

是的，二部跟三部还是有很多不一样的。要小心！