关于培养基模拟灌装中培养基的问题

开山大斧

我们用的是TSB，配剂环境是C级，注射用水稀释的，没有灭菌。因为在培养基的瓶子上我看到说使用方法是说热压灭菌，121℃，15min，而车间没有这样做。我想知道培养基本身是带菌的吗，为什么要先灭一下？？不灭会有什么影响？？

一次心

培养基中肯定是有微生物的，除非是无菌的。
配好后建议灭菌是为了降低微生物负载，降低除菌过滤器的负担，过滤器的能力不是100%。
灭菌及除菌过滤后的培养基肯定是要做促生长试验的，以确认培养基的有效性。

youwenmicro

cq254032003 发表于 2015-5-14 20:07
“培养基的瓶子上我看到说使用方法是说热压灭菌，121℃，15min”——这是告知你培养基灭菌的标准时间，因为 ...

欣赏您的思路。但可能会有误解

1）配置好后整体灭菌。整体灭菌的体积不宜过大，需要分装，否则培养基或者灭菌不完全或者灭菌过度导致质量破坏。
2）在除菌过滤器前端加预过滤器，并有可更换的备用滤芯。（有人说这偏离工艺，但是培养基灌装可不是验证过滤系统，此做法已在FDA注射剂项目上实践过）预过滤器使用与否，取决于培养基质量，好的培养基没有颗粒物问题，即有有微生物污染，数量也有限，可作为最差条件下的挑战。
3）先整一级除菌过滤到无菌的暂存罐里，用无菌压缩空气作动力打压灌装。如果与实际日常生产工艺程序相同，才有意义。

cq254032003

“培养基的瓶子上我看到说使用方法是说热压灭菌，121℃，15min”——这是告知你培养基灭菌的标准时间，因为通常培养基是用于无菌检测的，必须预先制成无菌的的，那么这个灭菌时间短了不能无菌，其促生长效果会有影响，所以要给你一个灭菌时间。

从你问的问题，基本上可以判断你几乎没有做培养基的经验，话很真啊，可能有点难接受，目的是请千万注意下面这个要点，多少厂血淋淋的教训都在这里：

培养基如自身不是无菌的，那么配置好后，长微生物的速度快的吓人，尤其做成水溶液以后，增殖非常的快；尽快你的除菌滤器是做了10的七次方的滤过挑战，但是注意：当面对一大罐细菌及其代谢死亡的渣渣后，除菌过滤器会很快堵死，导致你根本做不下去，其实就算培养基是无菌，但由于配置过程非无菌，如果培养基灌装时间很长，长到6小时乃至8小时以上，照样液体会浊的很，导致你堵的灌装不动，那么有三个思路及一个前提解决这个问题：

一个前提：培养基粉末本身要无菌，如买到非无菌，建议辐照灭掉。

三个思路：

1）配置好后整体灭菌。
2）在除菌过滤器前端加预过滤器，并有可更换的备用滤芯。（有人说这偏离工艺，但是培养基灌装可不是验证过滤系统，此做法已在FDA注射剂项目上实践过）
3）先整一级除菌过滤到无菌的暂存罐里，用无菌压缩空气作动力打压灌装。

做过三个厂的培养基验证，一个国内，一个FDA，一个欧盟，推荐3）最可靠也最可控；其次2）；最后1）。

石头968

配剂环境是C级，注射用水稀释的，没有灭菌。
C级环境和注射用水，都不能保证无菌，别考虑培养基本身了。

开山大斧

石头968 发表于 2015-5-14 20:30
配剂环境是C级，注射用水稀释的，没有灭菌。
C级环境和注射用水，都不能保证无菌，别考虑培养基本身了。

呃，好吧，过滤前的培养基才两天就细菌、霉菌不可计，所以我才纠结的

wangcj09

1.为什么培养基要灭菌呢？首先，C级的环境不能保证是完全无菌的，注射用水也是不能保证的，通过验证过的灭菌柜进行灭菌使用时比较好的。其次，培养基中各种成分，加热的目的是让培养基的各种成分更好的融合。
2.不灭菌的话，可能里面会有微生物的生长，影响里面的营养成分。
我在微生物方面的知识不是很丰富，以上只是代表我的想法，不要见笑哦！！

开山大斧

wangcj09 发表于 2015-5-14 20:43
1.为什么培养基要灭菌呢？首先，C级的环境不能保证是完全无菌的，注射用水也是不能保证的，通过验证过的灭菌 ...

感谢回复，大家相互交流嘛

hlmxjzb@163.com

培养基不灭菌的很容易长杂菌的

开山大斧

hlmxjzb@163.com 发表于 2015-5-14 21:22
培养基不灭菌的很容易长杂菌的

可是罐装的居然很不错，没有长菌

果果小迪

开山大斧 发表于 2015-5-14 21:27
可是罐装的居然很不错，没有长菌

不是有过滤器吗

开山大斧

果果小迪 发表于 2015-5-14 21:49
不是有过滤器吗

确实是，滤芯很强大

youwenmicro

培养基是否需要灭菌取决于培养基配制开始至除菌过滤结束之间的时间段。如果在四小时内，可以不灭菌，因为4小时内微生物尚处于生长的滞留期。

开山大斧

youwenmicro 发表于 2015-5-15 06:26
培养基是否需要灭菌取决于培养基配制开始至除菌过滤结束之间的时间段。如果在四小时内，可以不灭菌，因为4小 ...

这个还真不知道，学习啦

一笑而过52119

TSB本身不是无菌的，配置好后121℃ 15min是为了灭菌，不灭配制出来的就是带菌的。
培养基后应该会与滤芯的，能达到除菌的目的。

药窕淑女

一笑而过52119 发表于 2015-5-15 09:10
TSB本身不是无菌的，配置好后121℃ 15min是为了灭菌，不灭配制出来的就是带菌的。
培养基后应该会与滤芯的 ...

同意，说明书的目的是指如果要灭菌的话，可以在121度，15分钟的条件下灭，温度太高对培养基成分有影响。
培养基模拟灌装的话，可以用过滤除菌的

开山大斧

cq254032003 发表于 2015-5-15 12:07
“培养基的瓶子上我看到说使用方法是说热压灭菌，121℃，15min”——这是告知你培养基灭菌的标准时间，因为 ...

感谢回复

taotaoaiyaoyao

不用灭菌柜进行验证，也可以使用滤芯进行过滤，总之要保证经过除菌滤芯前的微生物负荷

开山大斧

taotaoaiyaoyao 发表于 2015-5-15 12:39
不用灭菌柜进行验证，也可以使用滤芯进行过滤，总之要保证经过除菌滤芯前的微生物负荷

说的很对，现在是负荷有点超标

cq254032003

youwenmicro 发表于 2015-5-15 12:21
欣赏您的思路。但可能会有误解

1）配置好后整体灭菌。整体灭菌的体积不宜过大，需要分装，否则培养基或 ...

1)是的，第一种这个是最不推荐的，其实还可以挑战你没做这么一罐培养基的灭菌验证，确认灭菌程序不影响促生长能力。

2）和3）您基于的观点是培养基灌装要覆盖过滤系统除菌能力的这么一个工况；但是，请注意我的前提是已做了滤器的细菌挑战性试验，确认了滤器在极高浓度10的七次方人工菌液下都能有效除菌，已经剔除了这个因素。实际上2）和3）都是实践过的做法，做了预先的风险评估，界定了培养基灌装考察的无菌风险因素的工艺范围是——除菌过滤器下游至最终轧盖（当然除菌滤器本身的无菌性因素也包括）。2）做法现场审核的是FDA；3）的做法是现场审核的是国家局和欧盟的非官方模拟审计。

cq254032003

youwenmicro 发表于 2015-5-15 12:21
欣赏您的思路。但可能会有误解

1）配置好后整体灭菌。整体灭菌的体积不宜过大，需要分装，否则培养基或 ...

“有微生物污染，数量也有限”到了水里会暴涨，经验现象是：开始黄色清亮，4-5小时颜色变深，6小时开始变浊，8小时以上一锅浓汤了。