求助：在测定一清颗粒中黄芩苷含量时，5针对照品溶液系统性试验，RSD超标。

ginnyran

如题：
我们在测定一清颗粒中黄芩苷含量时，5针对照品溶液系统性试验，RSD超标。
对该仪器进行了调查，仪器正常，因为在测定其他品种时，RSD均符合要求。

这已经是连续两次出现这个问题了。
就在两天前，也是测定黄芩苷对照品溶液时，出现同样的上述问题。今天又出现同样的问题。
不知道有没有蒲友遇到过类似问题？具体原因是什么？是如何解决的？

另外，请大家帮忙分析一下是什么原因。

方法为2015版药典方法。
色谱条件：C18,
流动相：甲醇-0.2mol/l磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.7）（42:58）
检测波长：275nm
理论板数：按黄芩苷峰计不得低于5000.（实际柱效约13000左右）

对照品溶液制备：取黄芩苷对照品约12.5mg，置250ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml含黄芩苷50ug）

salihamijiqi

峰面积有趋势上升还是下降吗，还是高高低低，或是4针正常1针偏离较多，保留时间是否有变化。测其他品种正常未必说明不是仪器的问题，我觉得仪器的问题可能性比较大，有没有换个仪器再试试呢。应该不会是方法的问题，起草所复核所做都没问题的。

123瑾

是对照品是制备出现问题了吗？

jarodjj

色谱柱是否过载？ 看一下你的理论塔板数是不是有些小 关注一下峰型 如果峰的保留时间没有变化可以尝试减小进样量再进针试试

hongwei2000

1、说明一下你是自动进样还是手动进样
2、说明一下你峰面积是否有变化趋势，例如越来越低
3、说明一下你空白是否有干扰
4、说明一下你对照品峰的响应值，例如峰高和信噪比
5、说明一下你RSD的要求
6、最好有图

ginnyran

1、自动进样器
2、变化趋势，没有明显的变化趋势，时好时坏。
3、方法学时，空白无干扰。在日常测定中，没有重新测定空白。
4、峰高月80-90，峰面积约30mau*min。
5、RSD按药典2.0%

附件是我们打印的综合图。


理论板数13000左右，换了一台仪器也出现类似的情况。该仪器和其他仪器检测其他品种未发现异常。
我们也怀疑对照品的问题。但并没有发现降解的趋势。

黄芩苷，溶解性差，我们采用的甲醇溶解，加水稀释。
黄芩苷在甲醇和水中的溶解性均不易溶解。
我们的处理方法为超声使溶解，然后定容。也怀疑对照品溶解的问题，但每次处理对照品，均肉眼判断其溶解后方定容。
另外但并非首次检验该品种，之前均未出现类似问题。

另，黄芩苷采用的是二级对照品。

green星期七

ginnyran 发表于 2016-1-25 13:33
1、自动进样器
2、变化趋势，没有明显的变化趋势，时好时坏。
3、方法学时，空白无干扰。在日常测定中， ...

1、你不觉得重新处理后的样品峰面积差异要小些了么？
2、黄芩苷本身的峰面积较小，对对照品配制要求肯定更高；
3、机器是戴安的么？样品盘有恒温系统？分析的时候开空调没？
4、做过黄芩苷的人都知道，黄芩苷容易出现峰不平行的情况，而大多数情况是由于配制对照品的原因。
（个人见解，希望能帮上忙）

jxcydm

曾经碰到一个样品，配置好倒入进样瓶之后有一个杂质总是会特别高，再重新倒入一个进样瓶，再进样，这个杂质会小很多，百思不得其解，后来多溶解一会样品就不会出现这种情况了。
LZ也说了，样品本身难溶于水于甲醇，表面上看是溶解好了，但实际可能没有完全溶解
LZ可能还是要注意一下样品溶解问题，另外可以看下是不是跟天气有关，如天气冷的时候容易出现这个问题，那就要考虑进样器保温了
个人还注意到称样量很小，lz也应该考虑样品转移过程中是不是可能有挂壁现象。
愚见!

ginnyran

多谢green星期七 和jxcydm 的分析。

1、你不觉得重新处理后的样品峰面积差异要小些了么？
确实发现有时候存在这个问题，但并不是每次重新处理后的样品峰面积平行后都好些。
2、黄芩苷本身的峰面积较小，对对照品配制要求肯定更高；
这个峰面积不算大，但对于中药检测，感觉大小还可以。
3、机器是戴安的么？样品盘有恒温系统？分析的时候开空调没？
是戴安的仪器，样品盘没有恒温系统，只有色谱柱有柱温箱，空调是开着的。温度大概有20°。
4、做过黄芩苷的人都知道，黄芩苷容易出现峰不平行的情况，而大多数情况是由于配制对照品的原因。
（个人见解，希望能帮上忙）

您提到黄芩苷容易出现峰不平行的情况，那是什么原因导致的呢？大多数情况都是由于配置对照品导致的，那么怎么解决呢？应该如何配制呢。

ginnyran

jxcydm 发表于 2016-1-26 09:00
曾经碰到一个样品，配置好倒入进样瓶之后有一个杂质总是会特别高，再重新倒入一个进样瓶，再进样，这个杂质 ...

LZ也说了，样品本身难溶于水于甲醇，表面上看是溶解好了，但实际可能没有完全溶解
LZ可能还是要注意一下样品溶解问题，另外可以看下是不是跟天气有关，如天气冷的时候容易出现这个问题，那就要考虑进样器保温了
个人还注意到称样量很小，lz也应该考虑样品转移过程中是不是可能有挂壁现象。

感谢jxcydm 的建议。
这些也有考虑。
看来需要进一步确定溶解性的问题啦。多谢诸位。

初夕

针筒过滤前面一部分不要试试

ginnyran

初夕 发表于 2016-1-27 00:12
针筒过滤前面一部分不要试试

弃去初滤液？