原液产生沉淀，怎么算？

临渊求药James

最近工艺里面产生一个问题，纯化好的蛋白原液，放置一段时间后就出现沉淀。关于这个沉淀，就有几种意见：

• 工艺部门认为所有蛋白类药物都会有沉淀，每次做成制剂前过滤一下就好了，反正符合注册标准；
• 质量部门认为该沉淀属于质量问题，可能产生不可预知的后果，应将该批次原液封存；
  

• 对除菌过滤前后原液做过比较，按原有注册标准检测，并无问题，蛋白含量、色谱峰面积等变化合理。
• 按内控其他指标显示，蛋白颗粒异常。
  

为此有几点疑问：

• 是否蛋白类药物都容易有沉淀生成？浓度才0.2mg/ml而已？
• 有没有类似原因导致SFDA查处或者相关CDE指导文件、法规对此有所规定？
• 疫苗、单抗或其他生物制品是否要求不一样？
  

hongwei2000

蛋白质沉淀很有可能由于溶液中的盐浓度或pH值不当引起的（甚至导致变性）
蛋白质药品一般都具有高溶解度
单抗药品甚至规格在几克的级别
如果低浓度就有析出
是否存在变性的情况（看活性）
即使没有变性
你过滤后含量和活性是否可能达到要求
而且由于溶解性和温度直接相关
怎么确保产品在贮存和使用中不会再有析出

window

不同的蛋白其稳定性差异很大

出现沉淀的原因可能有：
1、因溶液中离子、PH等影响，蛋白变性沉淀；
2、蛋白本身不稳定，聚合形成沉淀
3、微生物污染导致的絮状物沉淀等等
1、2致使的情况，在微量变性的情况下，因分析方法本身的灵敏度想通过前后蛋白含量或纯度的对比也许不能发现变化，除非大量沉淀出现。这需要在工艺开发阶段对蛋白溶液的稳定性进行评价，包括蛋白溶液贮存期间可能需要添加的稳定剂等。


在原液贮存期出现蛋白沉淀，是否可接受，这还是得回到研发时的质量研究结果来判断

静水蓝心

质量有问题

静水蓝心

要优化

静水蓝心

很可能是pH或者离子问题

紫幻剑雨888

pH值得影响应该很大，有时pH一个微小的变化也会导致其出现沉淀，还是不可逆的，工艺还需要优化。从质量方面考虑应该封存；要是从成本考虑就需要对活性等进行检验和风险评估了

北重楼

应该封存

xqliu

建议您还是封存为好，马上调查彻底解决，否则后患无穷。

wuzi123456

蛋白沉淀既然已经定性为异常，应立即开展调查识别造成这个问题的根本原因，对于原液是否可以使用，需要从质量、安全、效用等方面进行系统性的评价，而不是取决于个人或个别部门的意见。

wanggui_929

查找原因，封存

bio12

封存调查，

临渊求药James

window 发表于 2017-2-14 11:14
不同的蛋白其稳定性差异很大

出现沉淀的原因可能有：

现有研究结果显示，这沉淀就是蛋白，无微生物污染。翻查研发质量研究，发现缺乏相关的稳定性研究数据。只有成品研究。由于该原液制备时并无沉淀，只是存储一个月后才出现。
既然符合国家标准，而且国家标准并没有外观检查这一项，是否可以认为可以使用呢？

临渊求药James

hongwei2000 发表于 2017-2-14 10:24
蛋白质沉淀很有可能由于溶液中的盐浓度或pH值不当引起的（甚至导致变性）
蛋白质药品一般都具有高溶解度
...

活性没变，只是贮存后会继续析出。但是否可以认为既然符合现有注册标准，就可以要求质控部门放行，继续使用呢？反正异常指标都是内控的，不关系到SFDA检查，也没有违反相应法规！？

hongwei2000

hjylmj@126.com 发表于 2017-2-15 09:03
活性没变，只是贮存后会继续析出。但是否可以认为既然符合现有注册标准，就可以要求质控部门放行，继续使 ...

不能想当然的以为
要有数据说话

window

hjylmj@126.com 发表于 2017-2-15 09:00
现有研究结果显示，这沉淀就是蛋白，无微生物污染。翻查研发质量研究，发现缺乏相关的稳定性研究数据。只 ...

老生物制品很多确实缺乏原液的稳定性研究数据。但就最近十年来，都要求企业自己开展原液稳定性研究的。所以。。。。。
就事论事说，已经研究 发现是蛋白沉淀了，那么在确认蛋白纯度、活性的情况下，在进一步研究造成沉淀因素的同时，是可考虑在投入制剂使用前过来去除沉淀的使用方式。

ansion851014

hongwei2000 发表于 2017-2-14 10:24
蛋白质沉淀很有可能由于溶液中的盐浓度或pH值不当引起的（甚至导致变性）
蛋白质药品一般都具有高溶解度
...

同意你的观点，一般是与ph息息相关的。之前我们就出现过这种情况
如果全程使用一次性的模块来做培养，后期做制剂甚至不用加EDTA。

ansion851014

window 发表于 2017-2-14 11:14
不同的蛋白其稳定性差异很大

出现沉淀的原因可能有：

1，2是关键所在，目前的生物制药企业，出现微生物污染的不太多了前提是使用millpore 或者sartorius的一次性物品

老鸟

1、药典可见异物检查法中明确提出：供试品中不得检出金属屑……最大粒径超过2mm的块状物以及静置一定时间后轻轻旋转时肉眼可见的烟雾状微粒沉积物、无法计数的微粒群或摇不散的沉淀……，虽然在原液制成成品时可以经过过滤除去沉淀，那么你是否能保证做成成品后存放一段时间不会出现该现象？外观检查能通过？
2、必须要找到原因，虽然通过你的描述可以初步断定为蛋白变性导致，那么导致该结果的原因是什么？低浓度下还能出现沉淀？能影响的因素就只有盐浓度、pH值、温度。

大呆子

我觉得关键要看你这个产品是不是经常出现类似情况，如果经常出现那就是工艺问题，你的缓冲溶液有问题，如果偶尔出现，那就可能是其它原因所引起的，需要封存