【三明年会】化学发光最全基础知识二（IVD人士必备）

唐晓宇

化学发光分类

从反应原理上，化学发光免疫技术主要分为直接化学发光和酶促反应化学发光。

1） 直接化学发光：

化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。直接化学发光速度快、试剂稳定性好，但灵敏度略低于酶促发光。代表性的发光剂有：吖啶酯、三联吡啶钌。

吖啶酯：在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。这类化合物的发光为闪光型，加入发光启动试剂后0.4s 左右发射光强度达到最大，半衰期为0.9s左右。

三联吡啶钌：三联吡啶钌[RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。

2） 酶促反应化学发光：

利用标记酶的催化作用，使发光剂（底物）发光，这一类需酶催化后发光的发光剂称为酶促反应发光剂。酶促化学发光灵敏度高，但速度慢，酶活性容易受外界影响，其代表性的发光物质有鲁米诺及其衍生物、AMPPD。

鲁米诺及其衍生物（HRP)：激活酶为辣根过氧化物酶（HRP)，鲁米诺体系的发光基本上为闪光型且信号弱。但在使用增强剂的情况下，发光的持续时间可延到30-60min，发光强度至少增加100倍以上。

AMPPD (AP)：激活酶为碱性磷酸酶（AP），在碱性环境下，AMPPD的非酶解性的水解程度低，即本底低，热稳定性好；在pH=7.0的水中，30℃时的分解半衰期为142h；发光为辉光型，波长为470nm，在15min时强度达到高峰，15-60min内光信号强度维持一致，变化很小，即使在12h后仍能测定得出正确结果；加入增强剂如聚氯苄乙烯苄基二甲基铵(BDMQ)或BSA等，能明显增强AP酶解AMPPD的发光强度，增强因素达100-100000倍。

下一节分享化学发光常用术语哦，敬请期待

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