【珐成浩鑫杯】生物制药工艺过程微生物控制措施

药童12

生物制药工艺过程微生物控制措施

      不管是生物制药还化学仿制药生产，对生产过程中的微生物控制都是一个亘古不变的话题，因为微生物的来源可以是多个方面的，从原材料、工艺用水、工艺气体、生产人员、厂房设施等都有可能引入。我们生物制药生产，一方面要合理的利用微生物，同时要控制有害微生物的生长。所以生物制药的微生物控制还是与传统的控制方式不同的。有自己的特点。一旦细菌和真菌污染了生物制药的原材料、细胞库、细胞培养和纯化工艺以及最终阶段产品。即使后面被灭活，这些微生物也会引起安全性问题，因为可能会释放内毒素。

本文简略谈谈工艺阶段的一微生物的手段，生物制品比较典型的工艺大致分为 四个阶段，种子扩增培养阶段、发酵培养阶段、蛋白纯化阶段和制剂阶段，从这四个方面展开分析。

      在种子扩增培养阶段，这一阶段非常重要，对于所有生物技术来源的产品，从动物或微生物中提取的用于治疗目的的蛋白质。生产的第一步就是对取自经检定过的工作细胞库（WCB）中的小安瓿细胞进行扩增。从环境控制的角度来看，细胞接种区域是需要高度受控的区域，因为这些操作都被视为“开放的”。为防止细胞接种区域的污染和交叉污染，这些区域具有高效的终端微粒空气过滤功能（HEPA），空气返回量低。空气压差是由所需要的密封程度决定的，一般细胞接种区域大部分都在正压环境中操作。房间表面要光滑、无孔并且具有严格的清洁程序。操作者具有较高的着装要求，包括套装、鞋套、头套、安全眼镜、手套和口罩。

      接种采用无菌操作，所用的工器具都是经过灭菌且在有效期内使用的，目前一次性用品也很多，我们也可以选用一次性的，降低灭菌后工具污染的概率，如一次性吸管、培养瓶、摇瓶、一次性工作服等。生产所用的培养基经过灭菌和预培养确认，确认无污染，然后方可用于生产。配置培养基所需的血清要合格并且保持稳定。每次配液量以使用一个批次的量为宜，一次配液不要太多，一是短期内用不完造成营养成分损失需要补充，二是量大易造成污染。接种过程严格执行无菌操作，在生物安全柜中进行，及时做好各项消毒工作，人员操作要遵守无菌规范，并注意清场及废弃物处理。

      在发酵培养阶段，染菌是重大的质量事故，导致的损失也非常大，所以此阶段一般都要采用密闭系统，此阶段可能导致微生物污染的环节很多，如培养基灭菌环节，如果灭菌不彻底会导致染菌。接种环节，采用无菌接种手段。取样时一般使用取样瓶无菌对接的方式，发酵培养过程中的补料也是一个比较大的风险点，应确保管路的无菌连接，并在补料过程中确保管路的完好性。在使用前对罐体及各个管路的密封性应得到确认。对于通气管路，其老化、破裂、气膜破损等通常也是导致染菌的原因，应确保整个发酵培养过程密闭完好。

      纯化阶段，潜在的污染物是产品本身。在现今的大多数工艺中，纯化的第一步往往能够去除发酵阶段的很大部分的工艺相关杂质。随着工艺的进行，工艺相关杂质的类型和浓度降低，而产品的纯度和收率提高。常规做法是使用产品特定的分析方法来评估产品残留物。
在蛋白纯化阶段，此阶段的产品为原液，因为制剂部分会经过无菌过滤，这些工艺过程包括柱层析和超滤步骤，层析各步也都能起到一定的除菌作用。尽管非无菌，但是这些工艺一般认为是洁净的，使用预灭菌的袋子或者灭菌处理的罐，应尽量设计减少微生物负荷和内毒素的增加。
在制剂生产阶段，一旦有微生物污染，所有工作将前功尽弃，对原液进行 0.22um 的过滤。这并不是无菌过滤，而是为了将微生物负荷最小化的过滤。生产企业一般在原液生产车间内按照最高环境标准来设计这些区域。封闭系统的使用可以使得生产企业在限制更少的环境条件下操作。封闭系统旨在保护产品免受环境的直接影响。
      在清洁工艺验证、设备确认、人员更衣验证、环境监测合格、培养基模拟灌装验证合格的前提下，整个人、机、 料、法、环各大系统都必须保持验证状态并遵循严格的无菌保证措施。这里不是一个点的问题，也不是一个面的问题，而是一个三维立体的系统，从系统的层面去考虑，不得有遗漏，不得有盲区，做好每一个细节。生产工艺的每一步均需要给予控制，确保成品的各项指标符合规定。

稻草人°93

董春乐

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无语yja

挺好的。。。。。