内毒素检测趋势 - 重组C因子（rFC）法

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内毒素简介

内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁外膜的脂多糖成分，是由菌体裂解后释出的毒性产物，又称之为“热原”。为避免内毒素进入人体，对于易于引入内毒素的药品制剂、医疗器械等必须通过严格的内毒素检测。

各国药典关于内毒素检测

国家药典委员会在2024年4月公示“9251细菌内毒素检查法应用指导原则”，并在2024年7月第二次公示，草案的公示中也介绍了重组C因子（rFC）法，并明确了该方法为细菌内毒素检查法的补充方法。公示稿原文“重组C因子法(见本通则附:重组 C因子法)为细菌内毒素检查法的补充方法。当采用重组C因子法检测产品的细菌内毒素时，应符合“凡例”的相关规定。”

《美国药典》USP的 1085.1 章节中写明了可以使用重组C因子（rFC）方法来检测内毒素；而且今年2024年关于章节USP 86 《BACTERIAL ENDOTOXINS TEST USING RECOMBINANT REAGENTS》也结束了意见征收，其中介绍了包括重组C因子这种非动物来源的试剂可以用于内毒素的检测；并在2024年7月26日宣布USP 86 将在2024年11月发布，将于2025年5月正式生效。

（图片来源：https://www.usp.org/news/expert- ... al-derived-reagents）

《欧洲药典》2.6.32 章节也是明确写出了使用重组C因子（rFC）用于内毒素的检测；《日本药典》G4-4-180 章节中也介绍了使用重组C因子（rFC）来检测内毒素。

之所以各国药典都会使用或关注重组C因子（rFC）进行内毒素的检测，是因为传统的方法需要用到鲎试剂，属于动物来源，而且鲎是国家保护动物，虽然目前可以人工养殖，但是存在不可持续的问题，所以采用无动物来源的重组C因子（rFC）测试内毒素，来替代鲎试剂是一种可持续性的方案。

内毒素检测原理比较

01鲎试剂检测原理

鲎试剂包括三种蛋白酶原，在内毒素作用下产生一个级联反应。

内毒素首先激活其中的C因子，C因子活化后激活B因子，B因子再将其中的凝固酶原转化为凝固酶，由凝固酶使凝固蛋白原转化为凝固蛋白，产生凝胶。

02 重组C因子（rFC）检测内毒素原理

通过基因重组方式表达重组C因子蛋白（ Recombinant Factor C, rFC），rFC与内毒素接触后被激活，进而酶切水解底物释放荧光分子，经特定波长激发后产生荧光信号，荧光信号的强弱与内毒素浓度成正比，根据荧光信号值计算定量内毒素含量。

重组C因子（rFC）检测内毒素的优势

重组C因子（rFC）方法检测内毒素备受关注，主要还是基于其和传统方法的对比体现出的各个方面的优势。

操作便捷、快速

准确性好，可直接计算得出内毒素含量数值

灵敏度高，最低可到0.005EU/mL

批次稳定

无原料问题，无需鲎血原料，不依赖动物源性成分

特异性高，避免了G因子β-葡聚糖的假阳性干扰

适用于不同的内毒素工作标准品

成本更低、具有价格优势

目前重组C因子（rFC）

检测内毒素在制药行业的应用

重组C因子（rFC）检测内毒素由于其操作简单、快速，以及可以定量检测，使得很多制药企业用于过程的检测手段，方便客户积累准确的内毒素污染数据，方便通过历史数据的回顾来找到出现内毒素异常的原因，也给制定对应的控制程序起到非常好的指导作用。

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学习了，谢谢提供分享。