药典方法中为什么称了对照品又用面积归一法算含量？

小行星ji5

求助各位大神，在中国药典2020版关于硬脂酸的含量测定是这样描述的：含量测定】照气相色谱法（通则0521）测定。　　色谱条件与系统适用性试验 用聚乙二醇20M（或极性相近）为固定液的毛细管柱为色谱柱；起始温度为170℃，维持2分钟，以每分钟10℃的速率升温至240℃，维持数分钟，使色谱图记录至除溶剂峰外的第二个主峰保留时间的3倍；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃。硬脂酸甲酯峰与棕榈酸甲酯峰的分离度应大于5.0。　　测定法 取本品约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加三氟化硼甲醇溶液（13%～15%）5ml振摇使溶解，置水浴中回流20分钟，放冷，用正己烷10～15ml转移并洗涤至分液漏斗中，加水10ml与氯化钠饱和溶液10ml，振摇分层，弃去下层（水层），正己烷层加无水硫酸钠6g干燥除去水分后置25ml量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取硬脂酸与棕榈酸对照品各约50mg，同上法操作制得对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl注入气相色谱仪，记录色谱图。按面积归一化法计算供试品中硬脂酸（C18H36O2）与棕榈酸C16H32O2的含量。想问一下为什么称了对照品也进样了，但是药典最后说以面积归一法计算两者的含量？这种不是外标法计算含量吗？另外，对照品和供试品出的峰是对应的甲酯峰，按药典说的面积归一法计算，是直接把甲酯的峰当成酸的峰吗，所以归一法中甲酯峰的含量就认为是酸的含量？？

红烧牛肉面

硬脂酸甲酯峰与棕榈酸甲酯峰的分离度应大于5.0。
没有对照品那请问这个怎么判定呢？

小蜜蜂123

对照品溶液是用来考察系统适用性的，不参与供试品的计算

dengjianyyy

系统适用性要判断硬脂酸甲酯峰与棕榈酸甲酯峰的分离度应大于5.0，没有对照品拿啥判断。
用甲酯面积归一化法判断酸的百分比含量。

门门

红烧牛肉面 发表于 2025-3-19 08:32
硬脂酸甲酯峰与棕榈酸甲酯峰的分离度应大于5.0。
没有对照品那请问这个怎么判定呢？

这个还真能判定，用供试品的判定呗。
定位，得知道用哪个峰来计算呀！
那么才引出 题主真的问题，甲酯峰为啥就是酸的峰？ 你们都没回答呀。

答：对供试品那一通折腾，就是把脂肪酸衍生成脂肪酸甲酯，然后检测。

maxuedong

参照USP和EP，对照品溶液是用来做系统适用性试验的。中国药典未见相关要求。

小行星ji5

门门 发表于 2025-3-19 08:47
这个还真能判定，用供试品的判定呗。
定位，得知道用哪个峰来计算呀！
那么才引出 题主真的问题，甲酯 ...

你好，那请问一下，对照品如果用来做定位，系统适用性要求，是不是只需要每个对照品称一个样，每个样进一针就行？用面积归一法那供试品也是要双样双针吗？

小行星ji5

小蜜蜂123 发表于 2025-3-19 08:39
对照品溶液是用来考察系统适用性的，不参与供试品的计算

你好，那请问一下，对照品如果用来做定位，系统适用性要求，是不是只需要每个对照品称一个样，每个样进一针就行？用面积归一法那供试品也是要双样双针吗？

小行星ji5

maxuedong 发表于 2025-3-19 08:58
参照USP和EP，对照品溶液是用来做系统适用性试验的。中国药典未见相关要求。

你好，那请问一下，对照品如果用来做定位，系统适用性要求，是不是只需要每个对照品称一个样，每个样进一针就行？用面积归一法那供试品也是要双样双针吗？

红烧牛肉面

门门 发表于 2025-3-19 08:47
这个还真能判定，用供试品的判定呗。
定位，得知道用哪个峰来计算呀！
那么才引出 题主真的问题，甲酯 ...

门老师要打破砂锅问到底呀

maxuedong

小行星ji5 发表于 2025-3-19 09:07
你好，那请问一下，对照品如果用来做定位，系统适用性要求，是不是只需要每个对照品称一个样，每个样进一 ...

详见EP，有具体要求

天蓝雪

一般脂肪酸沸点高，相对不稳定，会通过甲酯化降低沸点进行气相检测；同时经过甲酯化、萃取等步骤，中间损失多少如果不确定的话，归一化法的结果会准确一些；甲酯都是酸生成的，所以这情况下把甲酯峰的占比当成酸的占比也没问题
对照品可以当成是定位用，需不需要进样5针看峰面积RSD这个看你们有没有另外要求，对照品除了第一次要单标的，后面正常检测都可以配制混标，一般这种也是双样去计算平均值

小行星ji5

天蓝雪 发表于 2025-3-19 10:18
一般脂肪酸沸点高，相对不稳定，会通过甲酯化降低沸点进行气相检测；同时经过甲酯化、萃取等步骤，中间损失 ...

目前研究阶段就是以中国药典的方法检测，药典上只规定了分离度的要求是不是对照品只进一针就行？你说的进样5针是称2份对照品进3+2针吗，面积归一法的话是不是不需要这样进？

门门

小行星ji5 发表于 2025-3-19 10:32
目前研究阶段就是以中国药典的方法检测，药典上只规定了分离度的要求是不是对照品只进一针就行？你说的进 ...

面积归一化法，不需要考虑进样精密度。
全都仅进一针就行。
供试品 为了满足习惯平行的心情 进两针吧。
首次多弄个对照单标定位，好知道两个峰哪个是哪个。然后都混合着，毕竟药典让混合着进，然后看分离度。

小行星ji5

门门 发表于 2025-3-19 10:43
面积归一化法，不需要考虑进样精密度。
全都仅进一针就行。
供试品 为了满足习惯平行的心情 进两针吧。 ...

好的，明白了，谢谢谢谢

maxuedong

maxuedong 发表于 2025-3-19 09:42
详见EP，有具体要求

对照一个样6针，供试品双样

小蜜蜂123

小行星ji5 发表于 2025-3-19 09:07
你好，那请问一下，对照品如果用来做定位，系统适用性要求，是不是只需要每个对照品称一个样，每个样进一 ...

不用每个对照品各自配成对照品溶液；如果稀释剂均可以溶解两个对照品，可以分别称取两个对照品，配成一份混合对照品溶液（也可以称为系统适用性溶液）。供试品溶液是否双样双针，法规没有要求，看自己公司规定。

小行星ji5

小蜜蜂123 发表于 2025-3-20 08:30
不用每个对照品各自配成对照品溶液；如果稀释剂均可以溶解两个对照品，可以分别称取两个对照品，配成一份 ...

好的，了解了，谢谢