如何提高氨基柱使用寿命

苏木

用于反相，流动相为乙腈及磷酸盐混合液，新柱子因保存在正相，使用前已用异丙醇过渡。使用后用90%水洗一小时，再用80%乙腈半小时;没有用于检测酸性较强的样品;寿命仍很短，柱效下降后，柱压无明显上升，哪位用过氨基柱有高手有更好的建议吗？多谢~~~~，

咕咕

楼主柱子寿命多长？
1、按该柱子使用说明书使用
2、按品种或检测成分使用，不同品种或成分用不同柱子。

hongwei2000

氨基柱就是这种性质，本身不太适合于反相，想要延长寿命不外是：
1、只用于正相
2、不用氨基柱而用糖柱（当然这不是GMP能够接受的，除非你经过验证二者等效）

苏木

hongwei2000 发表于 2013-7-24 14:58
氨基柱就是这种性质，本身不太适合于反相，想要延长寿命不外是：
1、只用于正相
2、不用氨基柱而用糖柱（ ...

不指望和C18一样用个一两年，但是寿命不超过一个月，是不是不太正常呢~这是药典方法，如果改动太大的话，会不会GMP检查通不过？请多指教~~

苏木

咕咕 发表于 2013-7-24 14:41
楼主柱子寿命多长？
1、按该柱子使用说明书使用
2、按品种或检测成分使用，不同品种或成分用不同柱子。

不超过一个月，清洗方法和保存咨询过工程师，是专用一个产品的~

月月

氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
柱效检测：

我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相：
10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速1.0
标准溶液：
乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯
检测波长254nm

这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。

氨基柱的使用：

需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5- 1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
氨基柱的清洗

简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。
平时在正相条件下使用：

首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。
平时在反相条件下使用：
缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。

用50倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。

这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等
LUNA氨基柱的使用方法
1.

氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA

氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。
2. 正相使用
2.1

新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。
2.1

正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。
2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。
3 反相使用
3.1

先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。
3.2

以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（
0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。
3.3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。
3.4

反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH

3.0-7.0
3.5

如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
3.6

有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
4
色谱柱的冲洗：简单说起来，正相条件下使用的氨基柱就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱就参照C18的清洗方法。
5 色谱柱的保存
5.1 正相使用时，将柱子冲洗干净后，用正己烷-乙腈（99：1）保存。
5.2
反相使用时，如短期不用，可用甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。
6 色谱柱的再生
6.1 方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以

0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
6.2

方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：
95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水
并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
6.3
方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：
95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水
再走流动相即可

苏木

月月 发表于 2013-7-25 10:09
氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶 ...

谢谢~，我觉得这里的再生方法，可能对于污染引起的柱效下降效果好，但是日常使用过程中， 感觉是因为氨基水解引起的，不知道怎么更有效避免水解的问题？

月月

苏木 发表于 2013-7-25 10:20
谢谢~，我觉得这里的再生方法，可能对于污染引起的柱效下降效果好，但是日常使用过程中， 感觉是因为氨基 ...

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

月月

月月 发表于 2013-7-25 10:24
反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越 ...

简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。
在正相条件下使用：
首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。
在反相条件下使用：
缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。用50倍纯甲醇冲洗之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。
这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。

咕咕

苏木 发表于 2013-7-25 10:06
不超过一个月，清洗方法和保存咨询过工程师，是专用一个产品的~

看来我们运气比较好，用了1年多

苏木

咕咕 发表于 2013-7-25 10:39
看来我们运气比较好，用了1年多

我们要是能用1年多，就开心死了，介绍一下经验吧？，比如你们平衡和清洗程序是什么样的

苏木

咕咕 发表于 2013-7-25 10:39
看来我们运气比较好，用了1年多

你们用的什么品牌的氨基柱呢？能说一下吗

咕咕

苏木 发表于 2013-7-25 11:00
我们要是能用1年多，就开心死了，介绍一下经验吧？，比如你们平衡和清洗程序是什么样的

按说明书使用，专品种使用。

苏木

咕咕 发表于 2013-7-25 12:05
按说明书使用，专品种使用。

我也按说明书用的，感觉还是不太好，能介绍下你们的日常清洗程序吗？

咕咕

苏木 发表于 2013-7-26 15:32
我也按说明书用的，感觉还是不太好，能介绍下你们的日常清洗程序吗？

使用后的清洗程序也是按说明书滴，梯度洗脱。

比翼︶风轻、

氨基柱比较容易水解、冲洗柱子时尽量使用少量水相冲洗来自: iPhone客户端

比翼︶风轻、

我们使用的一根氨基柱使用的时间也比较短、现在在尽量挽回 、可以交流下来自: iPhone客户端

苏木

比翼︶风轻、 发表于 2013-7-29 00:22
我们使用的一根氨基柱使用的时间也比较短、现在在尽量挽回 、可以交流下

你们是反相使用吗，能用多久呢，天天用的话~

比翼︶风轻、

苏木 发表于 2013-7-29 10:39
你们是反相使用吗，能用多久呢，天天用的话~

我们使用的也是反相柱，用了差不多两三个月，就水解了，其实柱子天天用比较好，氨基柱其实蛮难伺候的，就是在洗柱的时候容易水解。还有个办法可以提高柱效，就是在50%乙腈加入0.5%-1%的氨水冲洗柱子差不多15分钟，在用50%的乙腈冲洗，最后用纯乙腈保存。洗柱最好用50%的乙腈洗，水相多的话容易水解。

苏木

比翼︶风轻、 发表于 2013-7-29 19:43
我们使用的也是反相柱，用了差不多两三个月，就水解了，其实柱子天天用比较好，氨基柱其实蛮难伺候的，就 ...

你们用含氨水的50%乙腈冲洗后，再用50%乙腈洗多久呢？纯乙腈的话，对单向阀会不会不太好呢