高效液相色谱问题

畅畅妈妈

这两张图片是同一个样品上午和下午分别进的同一瓶样品。不知道为什么第一针在1到5分钟之间有鼓包？请大家分析下。昨天问过这个问题，图片不清楚，我重新发一下

畅畅妈妈

我们这个方法使用多年，一直没出现问题，最近开始频繁在相同时间出现鼓包，仪器工程师换过进样包也没解决问题。这个方法是直接进样，样品不用任何处理。所以没有空白。

zysx01234

主峰的峰高差这么多啊，第一针才9022，第二针17925，差不多差一倍。
有少许拖尾。

流动组是什么组成的，有些试剂可能会引起在前面的倒峰，但一般不会是鼓包。

从第一针基线看，基本是走下坡的，我认为仪器稳定时间不够，流动相平衡时间不够，应该让流动相走30分钟以上甚至60分钟后才能进样。另外，上午的温度波动会大一点。

zbcjy

是所有样品第一针都有鼓包还是就是序列里的第一针有鼓包？如果是序列里的第一针有鼓包，之后没有或者变小，可能是进样针有污染，用流动相或者样品溶剂洗洗针就好。

zbcjy

另外，同样样品，上下午的保留时间有一点差异，峰面积更是差得很多啊。楼主没有发现这个问题吗？

畅畅妈妈

zbcjy 发表于 2017-9-27 09:19
是所有样品第一针都有鼓包还是就是序列里的第一针有鼓包？如果是序列里的第一针有鼓包，之后没有或者变小， ...

不一定，有的时候都有鼓包，但之后又减小的趋势，有的后面就没有了，

畅畅妈妈

工程师换了整个进样包也没解决这个问题。

畅畅妈妈

我也发现第一针的峰面积小了一半多，这是什么原因呢？

zysx01234

畅畅妈妈 发表于 2017-9-27 09:25
我也发现第一针的峰面积小了一半多，这是什么原因呢？

系统不够稳定，增加洗针次数，增加一针流动相空白

畅畅妈妈

流动相是0.1mol/L磷酸盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液，PH7.0

畅畅妈妈

没有有机溶剂

畅畅妈妈

我们进样量很少，每次20ul左右，会不会因为这个让进样系统不稳定?

yuanshengj

前面的鼓包我认为是清洗不到位造成的。但是进样峰面积由30W到60W这东西没法解释。上午进样下午进样温度有差别造成波动可以理解，但是差了两倍，没法解释。手动进样时，定量环20ul，进样量控制在2倍以上，即进样量＞40ul。

畅畅妈妈

我们是自动进样，我猜测进样量过小，进样系统一段时间没用里面不平衡，所以第一针的问题大，增加一针或几针流动相做空白平衡一下系统不知道是否可行

畅畅妈妈

我们每次进样后都会清洗柱子，A管路/Channel of mobile phase A        乙腈/ Acetonitrile
B管路/Channel of mobile phase B        纯化水/Pure water
流动相组成
Mobile phase composition        0-30min        10%A        90%B
        30-60min        60%A        40%B
        60-90min        100%A        0%B
流速/Flow rate        1.0ml/min

朱欢欢

鼓包的问题，我觉得可能是前期没有平衡好吧，而且两针的保留时间也有差异，一般情况下，连续进样两针不会相差这么大的保留时间的，另外，您的峰面积差异较大，会不会是进样针的问题，建议进样之前先洗针，并运行一针空白

蓝的田

有几个问题，需要详细些，
1.上午进样，鼓包是越来越小，那肯定是残留引起。
2.换了进样包，是换进样针和针座吗，还是包含六通转子？
3.压力波动如何？
加上这些才好判断是泵还是进样系统问题

畅畅妈妈

朱欢欢 发表于 2017-9-27 09:56
鼓包的问题，我觉得可能是前期没有平衡好吧，而且两针的保留时间也有差异，一般情况下，连续进样两针不会相 ...

我的图不完整，两针样品图谱采集时间都是30分钟

畅畅妈妈

蓝的田 发表于 2017-9-27 10:02
有几个问题，需要详细些，
1.上午进样，鼓包是越来越小，那肯定是残留引起。
2.换了进样包，是换进样针和 ...

具体更换了什么我也不清楚，只听说整个进样包都换了

畅畅妈妈

蓝的田 发表于 2017-9-27 10:02
有几个问题，需要详细些，
1.上午进样，鼓包是越来越小，那肯定是残留引起。
2.换了进样包，是换进样针和 ...

我们QC说这回的鼓包与之前的鼓包不一样，出现更早，早了一分钟就开始，认为是基线漂移，您觉得可能吗？