培养基模拟灌装试验培养温度超过标准范围

sunshineqa

如题，我们在做一批培养基模拟灌装试验，灌装完成后需要在培养库内进行20--25度培养7天，用德图的温度探头进行温度监测。培养结束后发现中间有2.5小时培养温度低于20度，最低16度，总的培养时间8天，培养基没有长菌现象，这种情况下，培养基结果可信吗？是不是还需要重新进行培养基试验？请各位指教！！！

hongwei2000

你在培养箱里放置的时间到取出时间会分秒不差吗？
从几个角度可以说明：
1）根据修约原则，6天12小时到7天12小时之间都是7天
2）从微生物角度来说，霉菌/酵母菌生长一代需要几个小时，就算2.5小时一代，差着这一代就会使检验产生从无到有的变化吗？
3）你计时从什么时间开始，从放入箱子中？那从灌装到放入箱子中多长时间、多少温度？
4）你环境温度是多少，夏天、冬天，你培养箱在培养中间开不开门放样取样，如果有放取样，箱体会不会有超温？
以上是你评估要考虑的，也是你的疑惑所在。
但归根到底，是你文件没有规定超温的处理方法，你可以趁机进行偏差调查，一方面是找超温的原因，建立措施以避免，另一方面你要修改你无菌/微生物限度培养文件，规定超温后的处理措施。

其实我是傲娇

一般来说是培养14天，还有一个30-35度也要考察，是由于什么原因没做呢？你们这个情况温度偏差的也不是太大，做个说明就可以了，较真的话阳性可以搞个类似的温度变化实验

sunshineqa

其实我是傲娇 发表于 2018-5-3 08:39
一般来说是培养14天，还有一个30-35度也要考察，是由于什么原因没做呢？你们这个情况温度偏差的也不是太大 ...

30-35度考察了，温度没问题，我没有说明白
我们低温度的培养完直接换高温度的了，最后导出的数据，所以发现偏差晚了

xqliu

看阳性对照如何,如果阳性都不生长，只有重做了。

lzq050628

先做个风评，最好还是再搞一次

sunshineqa

hongwei2000 发表于 2018-5-3 09:38
你在培养箱里放置的时间到取出时间会分秒不差吗？
从几个角度可以说明：
1）根据修约原则，6天12小时到7 ...

先谢谢您的回复，针对您提出的我回答一下：
1.培养时间：从放入培养库开始计时，中间检查都是再培养库中进行，短暂的开关门不影响温度，做过培养库的温度分布验证；由于赶上周末，所以低温的总培养时间达到8天18小时；我们考虑的是连续培养至少7天，不是累计；
2.微生物的角度，我不太懂，根据QC微生物检验组的意见，这个过程影响因素太多，不好评估影响，所以建议重做；日常微生物实验使用的培养箱，培养箱温度超标时，里面的样品都是重新做，这个实验室检验有相应文件要求；
3.培养库温度异常，设备部正在找原因；
现在针对培养基，生产排产紧张，车间是阶段生产，不想重做，我担心的是检查员看到，会不会纠这个问题。不知道有没有关于微生物培养更合理更充分的解释。

Doitasyoulike

开个偏差调查了，除了找出根本原因，采取CAPA外，最重要的是对你这次培养基灌装的影响进行评估，可以从下面几个方面：
1、计算MKT温度，说明MKT温度是在20-25之间的
2、随机挑战未长菌的已灌装培养基做促生长试验，证明培养基生长能力未受到影响
3、可以适当进行温度挑战，涵盖你偏差出现的最低温度和最长时间，然后用挑战的结果来评估这次偏差对你结论的影响，挑战试验可以考虑在促生长试验时进行，或者挑战阴性的培养基额外进行
个人觉得2.5小时的低温应该不会有太多的影响，但是必须得用数据说话
需要不需要重新进行培养基灌装试验，还是看你评估的数据

sunshineqa

Doitasyoulike 发表于 2018-5-3 11:48
开个偏差调查了，除了找出根本原因，采取CAPA外，最重要的是对你这次培养基灌装的影响进行评估，可以从下面 ...

谢谢您的建议，我马上转达给QC

hongwei2000

sunshineqa 发表于 2018-5-3 11:43
先谢谢您的回复，针对您提出的我回答一下：
1.培养时间：从放入培养库开始计时，中间检查都是再培养库中 ...

你校真就跟你校一吧，想怎么做还是你自己，但要提醒的是，所有重新做的结果，即使理由再充分也难免别人有其他的想法。
1、你说你做过mapping，可以所谓的连续不间断培养，开门不负影响，那我想问一下，你的采集间隔时间是多少，探头的敏感度如何（环境温度变化5度/分钟，探头能够变化多少），你开门多长时间，采集点是否覆盖开门的过程，如果不是，那mapping只是给别人和自己看的，虽然箱内物体也有热容，但开门仍可能有箱体温度超标，只是你mapping不一定采集得到。如果箱体的热源不是在箱体的底部，那么箱内保温能力一定是比较差的，开门影响就比较大。
2、微生物成长的条件，一个关键因素是营养、一个是温度。其生长与温度在一定温度范围内呈类抛物线状，例如在25度左右有利于真菌的生长，过高则易于衰老和死亡，过低则不易生长甚至休眠。我们之所以把菌种放在低温环境中，就是不希望其生长。所以20度相对于25度来说，只是生长缓慢一点，相当于小孩正常生长一顿要吃五两饭，现在你只给他四两，他也能生长，只不过长得慢一点。但不管长得快点还是慢点，到了年龄，他就不影响结婚生子了，况且你给他四两饭的时候只是生长过程中的那么一丁点时间。你有必要就因此不要这个孩子去再生一个吗。
前面说了，你可以文件规定，但文件规定也要合理的，否则就可能有人质疑。例如你上面的例子呈阳性了，然后按照你的文件去重新做，结果呈阴性了，难道你就说没有问题了？

歪打正着

上面的人说的很官话，什么调查，偏差啊，你说这些有用吗，看着就烦。也别说风险评估啊。
别人问行不行，就是风险评估。
上面的那个谁，写了了这么多，还写了MTK，真让人笑话，这可不是药品稳定性啊！

我只能说低温会杀死细菌，会杀死的。每个微生物都有适宜的生长条件。经过低温的微生物，肯定比正常数量少了。
剩下的事情，你自己评估吧。

sunshineqa

hongwei2000 发表于 2018-5-3 13:16
你校真就跟你校一吧，想怎么做还是你自己，但要提醒的是，所有重新做的结果，即使理由再充分也难免别人有 ...

QA做时间长了，不较真难受，不较真您就不会解释那么详细，我也学不到那么多，不知道自己还有哪些没有考虑到，谢谢

小金库

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