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单克隆抗体纯化病毒灭活/去除的验证
判断病毒去除/灭活的有效性须综合考虑，不能仅以病毒去除/灭活的量来确定。在确
定有效之前，必须考虑如下因素，审慎评价每次验证结果。
1．验证试验所选择的病毒是否适宜，病毒验证的设计是否合理。
2．病毒降低量（log10）≥4 logs，表示该步骤去除/灭活病毒有效。如因检测方法造成
病毒降低量＜4 logs时，应盲传三代，如无病毒检出，可认定是有效的灭活病毒方法。
3．病毒灭活动力学可更好的显示病毒灭活的效果。病毒灭活通常不是简单的一级反应。往往是起始反应速率快，其后变慢。如果病毒灭活速率随时间明显降低，表示该方法可能无效，或者残留的指示病毒对该灭活方法有抵抗力，说明该步病毒灭活方法无效。
4．病毒实际滴度为基础病毒，指示病毒与样品1:9的比例混匀后零点取样的病毒滴度，通过与经去除/灭活病毒后的测定的实际病毒残留量的比较，作为该病毒去除/灭活方法（步骤）实际的灭活病毒的量。
5．病毒检测敏感度的限值。
可以先外包给CRO做下。用中检所认可的指示病毒，确定两个抗体能保持稳定的低pH值以及不同的处理时间长度，根据《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》能去除4个log就行。低pH灭活完全不用担心，0.5hr基本就可以了。
抗体在稳定范围（比如pH可以降到3，灭活时间可以3小时），中检所验证是提供具体的参数（比如pH3.3,灭活1h),然后他们验证，如果验证不过，需要重新弄灭活工艺，然后重新中检所排队。国内规定死，他们认定的事情你不做，就能烦死你。
例如国家局审评老师说IEX-HPLC是所有蛋白类药物分析HPLC中最灵敏的，能分出更多的杂质，不管什么项目发补或者交流中，总是让你要靠上去，其实不是所有的都这样，只能讲互补，对抗体变异体可能是这样，但是对于多肽或小蛋白未必，或者某一个方法已可以了，不能一竿子搞死。之前看过国外重组凝血八因子的资料，其中降到除了专门去污剂步骤去除病毒外，每个层析步骤也有去除效果，那整体加起来下降很多log了，这个品种貌似不适合纳滤，损失非常严重。
病毒灭活去除验证指南.pdf
(5.21 MB, 下载次数: 430, 售价: 1 金币)
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发表于 2018-6-26 08:00:00
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