紧急求助:出大事了，HPLC主峰后有一个紫外光谱图一致的小峰的

JingleDancer · 发表于 2019-3-13 11:46:52

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如题，该小峰时大时小，时有时不有，已知主成分很稳定，有没有大神懂，会不会是溶剂效应或
柱筛板塌了，关键换柱子也没用，该怎么办，头大。

色谱图

光谱图

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JingleDancer · 发表于 2019-3-19 14:37:36

zfamous 发表于 2019-3-19 10:03
你说减少进样量峰就消失了，看你这个图真的不像是进样量过载，过载了应该是平头峰，或者是分叉峰。这个图 ...

据我分析，你描述的过载即出现平头峰是样品浓度大，色谱峰的响应超过了检测器显示的最大值；在我的这种情况下，主峰未出现平头峰，但后面会有小峰，依我理解是主成分与色谱柱固定相的相互作用（比如吸附）达到了饱和，导致主成分在色谱柱内产生了一段浓度梯度，导致主峰严重拖尾或出现小峰的情况，我减低了进样针的进样量就没了。

Doitasyoulike · 发表于 2019-3-14 09:26:39

JingleDancer 发表于 2019-3-14 08:54
谢谢诸位了，已解决，是柱容量超了，减少进样量小峰就没了

你们检测方法的进样量能够随便变的？
退一万步来说，即使允许你减小进样量，你怎么保证一些杂质随着浓度的减小而响应变小，从而变成未检出？

飞凌大圣 · 发表于 2019-3-13 13:32:38

可以从以下几点进行考虑：
1、检测方法本身是否有问题，包括流动相、色谱柱、检测波长等。
2、如果不是检测方法问题，查一下色谱柱，换个生产商（如waters、Agilent等），色谱柱不同分离性效能差别比较大。
3、你所检测的主药所谓的稳定，是通过专属性破坏试验、影响因素试验确证了吗？如果没有，就不要说这个主药是稳定的。
4、有时间换一台仪器做一下，你会发现很多有趣的结果。

呵呵，以上纯属个人意见，仅供参考！

p2bywgCLhf · 发表于 2019-3-13 12:15:15

有可能是异构体。

氯雷他定 · 发表于 2019-3-13 12:30:31

这就是杂质啊

氯雷他定 · 发表于 2019-3-13 12:36:04

溶剂效应或者柱子塌陷，空白样走的出来，

Fley · 发表于 2019-3-13 13:09:11

进一下空白溶剂看看此位置有无峰，可以排除溶剂峰

菊花大王张 · 发表于 2019-3-13 14:38:11

验证过的方法还是在方法开发？
1、首先扎空白扎，没问题的话排除流动相、仪器、色谱柱等问题
2、同一个样连续进如果都没有（且一致），保证样品确实是稳定的
3、重新配样同一个样连续进前面有，后面没有，样品稳定性出现问题
3、重新配样同一个样连续进如果都有（且一致），那就是配置过程出现问题，回顾配置过程中的细节，包括溶剂，配置方法，看看容量瓶、进样瓶、实验过程中接触样品的容器是否污染等等
不知道你的实验具体操作参数，只能这样简单的分析

Russell-Cao · 发表于 2019-3-13 16:48:38

这个峰好傲娇啊

zzy012345 · 发表于 2019-3-13 17:11:13

明显是一个杂质峰

JingleDancer · 发表于 2019-3-14 08:54:22

飞凌大圣发表于 2019-3-13 13:32
可以从以下几点进行考虑：
1、检测方法本身是否有问题，包括流动相、色谱柱、检测波长等。
2、如果不是检 ...

谢谢诸位了，已解决，是柱容量超了，减少进样量小峰就没了

Chenyuanfeng · 发表于 2019-3-14 09:43:06

JingleDancer 发表于 2019-3-14 08:54
谢谢诸位了，已解决，是柱容量超了，减少进样量小峰就没了

学习了，谢谢分享

时光里的繁星 · 发表于 2019-3-14 10:14:31

考虑一下异构体，另外溶液稳定性要做，可能是降解产物干扰，排除完方法然后就是机器和色谱柱的问题了

可亲可爱 · 发表于 2019-3-14 11:09:35

JingleDancer 发表于 2019-3-14 08:54
谢谢诸位了，已解决，是柱容量超了，减少进样量小峰就没了

就是的，怎么说改就改啊？当初方法验证是怎么做啊？

JingleDancer · 发表于 2019-3-14 17:00:26

本帖最后由 JingleDancer 于 2019-3-14 17:01 编辑

Doitasyoulike 发表于 2019-3-14 09:26
你们检测方法的进样量能够随便变的？
退一万步来说，即使允许你减小进样量，你怎么保证一些杂质随着浓度 ...

亲，补充如下：我们目前是方法开发阶段，可以改变色谱条件，至于杂质响应的话，我们会看杂质信噪比的，就上文中的小峰，峰面积占主峰约6%，响应相当高了，减少进样量，小峰完全消失，可不是因为响应低未检出。

JingleDancer · 发表于 2019-3-14 17:02:34

可亲可爱发表于 2019-3-14 11:09
就是的，怎么说改就改啊？当初方法验证是怎么做啊？

哈，方法开发中，尚未验证

剑魔 · 发表于 2019-3-15 13:44:40

看到出大事才进来的，结果就这事。

麦田.守望 · 发表于 2019-3-17 23:18:43

用刀把它刮掉，画线修平，OK收工

zfamous · 发表于 2019-3-19 10:03:41

JingleDancer 发表于 2019-3-14 17:00
亲，补充如下：我们目前是方法开发阶段，可以改变色谱条件，至于杂质响应的话，我们会看杂质信噪比的，就 ...

你说减少进样量峰就消失了，看你这个图真的不像是进样量过载，过载了应该是平头峰，或者是分叉峰。这个图里两个峰顶的浓度差的有点多，看起来还是更像因为溶剂效应导致的。
进样量减少了多少，之前进样量是多少？
降低进样量，对于溶剂效应里，流动相与样品稀释剂溶解性差的不那么多，也会好转。

卢青 · 发表于 2019-3-19 10:19:47

过载还有这样的问题啊，进样量减少了多少？是降低浓度还是减少进样体积？

[已解决] 紧急求助:出大事了，HPLC主峰后有一个紫外光谱图一致的小峰的

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