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人员、动物及物品进出实验动物屏障设施的操作
【目的与要求】
掌握人员进出实验动物屏障设施的具体步骤、人员净化的具体要求及设备使用;掌握动物、物品传递的步骤,传递过程中的具体要求及设备使用;掌握渡槽、传递窗、预真空高压灭菌器的使用。
【原理】
通过淋浴,穿着无菌服和风淋等措施,防止人员进入屏障设施造成污染。通过一系列无菌操作将动物传进和传出屏障设施,使动物和屏障设施在操作过程中不受污染。
凡能够高压灭菌的物品,一律由双扉高压灭菌锅灭菌后传入。如笼架(组装件)、鼠盒(可带垫料)、工作服等。不耐热的物品可由灭菌渡槽或传递窗传入,如经辐照灭菌后的饲料、塑料微型喷雾器等。走廊、缓冲间、浴室、传递窗等区域,通常采用紫外线照射和熏蒸消毒。动物饮用水一般采用过滤除菌或高压灭菌。
【设施设备、试剂与仪器】
1.更衣室(一更、二更)、淋浴室、无菌工作服(衣裤、帽、口罩、袜等)、风淋室厂家,风淋室、泡手桶、消毒药。
2.缓冲间、传递窗、动物包装盒等。
3.渡槽、消毒液、500m1 量筒。
4.预真空双扉高压灭菌器、高压灭菌效果指示剂、鼠盒、预处理后的垫料。
【操作方法与步骤】
一、人员进入屏障设施
更拖鞋→一更(脱衣裤) →淋浴→二更(穿无菌内衣及工作服) →风淋室→洁净区。
二、动物传进屏障设施
1.准备 在引进动物到达前,在检疫室内准备相应数量的鼠盒。传递窗内侧准备两份消毒液,一份内浸有长镊,另一份浸有刀具。传递窗外侧准备消毒液、洁净抹布。检查传递窗的紫外灯。
2.传递 用消毒液擦洗包装盒并放人传递窗,关紧外侧门打开紫外灯并定时20min。
3.接受动物 紫外灯自动关闭后打开内侧门。戴好橡胶手套,从消毒液内取出刀具,划开包装盒的密封胶带,打开包装盒。刀具放回消毒液并洗消双手。用长镊将动物一一放人饲养盒内。操作完毕把消毒液和包装盒放人传递窗,关闭内侧门。包装盒和消毒液由外侧取走处理。
4.检疫观察 按规定进行检疫。
三、 动物发放
1.挑选动物 动物待发人员按用户的要求严格挑选动物,做到数量、体重、性别等准确无误。
2.包装动物 挑选完毕传入待发室,工作人员再次确认动物的数量、性别等后放入包装盒。用胶带密封后在相应部位标明动物的品种、体重、数量、性别等。
3.传递 动物包装完毕放人传递窗或缓冲间,关闭内侧门。外面工作人员取出动物并消毒传递窗或缓冲间。
四、高压蒸汽灭菌
1.准备 打开电、汽、水开关,预热夹层。预热的同时可以进行装锅等准备工作。
2.装锅 在确认内侧门闭紧的前提下打开外侧门。将欲灭菌物品如饲养盒(放好垫料)、饮水瓶、工作服等码放在锅内。不可过松,也不可过挤。在适当位置(底层的饲养盒内)放人灭菌效果指示剂或卡,关闭锅门。
3.灭菌 按启动钮,高压锅即按预先设定的程序自动灭菌——脉动真空3 次斗132℃灭菌4min呻排汽干燥4min斗结束信号。
4.出锅 屏障内部人员在结束信号鸣响后再次确认压力表指示为“零”时方可开门出锅。出锅完毕随手关紧锅门直至门闭指示灯亮。
五、灭菌渡槽的使用
1.准备 用自来水把渡槽洗刷干净。关闭排水阀,灌注自来水,据事先量好的体积,按1:600 加入百毒杀。当渡槽内的液面距中隔板2—3 cm时,通知室内工作人员从远端缓缓打开渡槽内盖,利用室内正压挤出槽内存留的污染空气。液面升至预定位置(超过中隔板底边10cm以上)时停止注水。
2.传递 操作人员戴好长袖橡胶手套,将物品缓缓放人渡槽。比重大(沉底)的物品可直接推过中隔板,20min后捞出。比重小(漂浮)的物品要浸入液体里,20 min后推过中隔板并捞出。
六、缓冲间和传递窗的使用
一般不使用缓冲间和传递窗向屏障设施内传递物品。只有在传人笼架、精密仪器和传进动物时才使用缓冲间和传递窗,它们的主要作用是向外传递动物和物品。
1.传人物品时先用消毒药充分洗消其表面,再用消毒药喷雾和紫外线照射消毒。
2.传人精密仪器时,可把仪器放人特制口袋内用环氧乙烷(900ms/L,26-32 吧,8h)灭菌,口袋放人传递窗按上述方法处理。
3.向外传送物品时,在确认内侧门已关闭后方可打开外侧门搬运物品。搬运完毕,清理并用消毒液洗消表面,紫外线照射20min以上。
【注意事项】
1.必须按程序操作,不可减免操作步骤。
2.淋浴时应先洗头发后洗躯体,头洗两遍,手指刷洗两遍,淋浴时间不少于6min。
3.二更时应站立操作,洁净服不能接触任何物品。
4.在进入洁净区前要用0.025%的“百毒杀”液洗搓手掌和手背或。
5.风机运转稳定后进人风淋室,必须按要求吹净各部位和保证吹淋时间不少于3 min。风机停稳后方可打开内侧门进入清洁区。
6.在屏障设施内不同区域工作要着不同颜色与要求的工作服和工作鞋。
7.传进动物的包装要完好无损。
8.消毒时不能留下死角。要保证消毒药的浓度和消毒时间。
9.发出的动物一定要确认性别,杜绝在雌性动物中混有雄性。
10.高压锅内物品不可挤压过紧。包裹工作服等物品时不可缠绕过实。
11.传递窗、缓冲间的内外门严禁同时打开。外侧门打开后必须随时消毒。
12.渡槽的消毒药液要定时更换。
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