兽医诊断制品的质量研究：确定新研制诊断制品的优越性，才能确保通过新兽药注册

上林苑监

兽医诊断制品的质量研究：确定新研制诊断制品的优越性，才能确保通过新兽药注册

兽医诊断制品的质量研究就是证明新研发诊断试剂（盒）质量符合预期目标的过程。
一实验室制品制备和检验

为了对新研制的诊断制品进行质量研究，应当制备至少3批次制品。试制时，应当用已经建立的菌（毒、虫）种和细胞库，选择符合标准的原辅材料，按照已确定的生产工艺，在实验室中生产，进行必要的检验且合格后，才可用于质量研究。

二敏感性研究

在敏感性研究中，首先要考虑用何种标准物质。农业部 2335号公告规定，用于敏感性研究的标准物质包括阴性标准物质、已知感染动物样品、已知弱阳性和阳性样品。用上述标准物质按照诊断制品的使用和判定方法进行检验即可。其敏感性可用阳性率来表示，也可以用最低检出量来表示。目前多用最低检出量来表示。一般对阳性标准物质进行适宜稀释度稀释后，用在研诊断试剂（盒）进行检验，最终确定呈现阳性结果的最低标的物检出量或其最高稀释倍数。

三特异性研究

在特异性研究中，首先要考虑的也是使用何种标准物质。农业部2335号公告规定，用于特异性研究的标准物质包括已知未感染动物样品、常规免疫动物的样品、有关病原或抗原（如培养基质、动物组织）及抗体。特异性研究的最终目的就是验证在研诊断试剂（盒）是否会和阴性样本发生阳性反应，即非特异性反应。在试剂盒特异性研究中至少应用以下标准物质或样品进行试验∶

1.与检测目标种属较近并可能存在非特异性反应的抗原或抗体 如猪瘟病毒和牛黏膜病病毒种属较近，在开展猪瘟抗体检测试剂盒特异性研究中，就应将牛黏膜病病毒阳性血清作为检测标的物，考察猪瘟抗体检测试剂盒是否与其发生非特异性反应。

2.有关组织或细胞及其抗体 在用全病毒及其多克隆抗体作为组分组装试剂盒时，应当选择培养病毒所用组织或细胞及其抗体，进行特异性研究，以保证试剂盒的特异性。如鸡传染性法氏囊病毒琼扩抗原如果系用 DF1细胞培养，就应将抗原和 DF1 细胞免疫鸡的血清进行试验，确定其是否会发生非特异性反应。

3.表达用的空白宿主菌、含有空载体的空白宿主菌、细胞及其抗体 基因工程技术在诊断试剂（盒）研制中的应用越来越多，包括用基因工程菌或细胞表达抗原，或用表达的蛋白制备单克隆抗体。表达的抗原或蛋白需经过纯化、浓缩，如纯化处理不当，有可能会留有部分或少量的表达宿主菌的蛋白，在理论上存在非特异性反应的可能性。为了更好地控制制品质量，保证其特异性，均会选择相应的标准物质进行诊断制品的特异性研究。如用大肠杆菌表达的蛋白进行 ELISA 试剂盒研究时，应当制备空白大肠杆菌的阳性血清和含空载体的空白大肠杆菌阳性血清作为检测标的物，用试剂盒进行检测，以确保试剂盒的特异性。

4.一定数量的已知阳性样品和阴性样品 这两种样品，特别是阴性样品，是特异性研究中必需的。样品数量应能保证其结果具有生物统计学意义，一般须达到 30份。对阴性样品的检测结果，通常会作为诊断试剂（盒）判定标准中临界值的制定依据。

总之，诊断制品的特异性是其非常重要的指标，比起敏感性来，试剂盒特异性的高低越来越被人们关注。非特异性反应较为明显的试剂盒，一旦在兽医临床实践中大量使用，会给疫病的诊断、流行病学调查和抗体检测等工作带来误判，甚至影响到疫病的防控及相应措施的实施。所以，针对诊断制品的特异性研究，广大研发者应给予充分重视，在可能的情况下，尽可能使用更多的诊断用标准物质来考察制品的特异性。

四重复性和可靠性研究

按照农业部公告第2335号要求，应有至少3 批诊断制品的批间和批内的可重复性试验报告。同时还应在不少于3个不同实验室进行比对试验，考察制品的可重复性和可靠性。有些诊断制品，如 ELISA试剂盒的组分复杂，其质量稳定性受到很多因素的影响，经常出现明显的批间差异，这一点也正是我国兽医诊断试剂（盒）质量与国外存在较大差距之处。有的试剂盒甚至存在明显批间差异。研究中，一般每批次取5个试剂盒，分别对强阳性标准物质、阳性标准物质、弱阳性标准物质和阴性标准物质，至少进行4次重复试验，用统计学方法计算其变异系数，最终评定在研试剂盒的重复性是否良好。

农业部公告第 2335号要求，进行比对试验的实验室应为经农业部考核合格的省级以上兽医主管部门设置的兽医实验室。有国家参考实验室或农业部指定的专业实验室的，应至少选择1家国家参考实验室或农业部指定的专业实验室实施比对试验。每个实验室应当对3批次制品进行重复性试验，重复测试试剂盒的敏感性和特异性。五保存期试验

应用至少3批次诊断试剂（盒）进行保存期试验。诊断制品的保存期试验一般多是在特定保存条件下（2~8℃或一20℃以下，依制品说明书中规定的保存条件而定），在不同的保存时间点，取保存的诊断制品进行检验，考察其性状、无菌、敏感性和特异性等各项指标是否合格。考虑到实际应用、保存运输的复杂性，规定的保存期要留有一定空间，目前在确定诊断制品保存期时常将有效的保存期缩减3个月。如制品在15个月的保存期试验中，各项指标都合格;则该制品的保存期应定为 12个月。

六符合率试验

符合率就是与其他诊断方法、特别是与金标准方法检测结果相比较的一致性。选择一定数量（至少30 份）的阳性样本、阴性样本、强阳性标准物质、阳性标准物质、弱阳性标准物质和阴性标准物质，用在研诊断制品和其他制品同时进行检测，并按各自判定标准进行结果判定，对不同方法检测的阴性结果和阳性结果进行比较分析，确定不同方法间的符合率。

七与批准上市的同类制品进行比较的试验

同类制品指的是依据相同原理研制的、用于检测相同标的物的诊断制品。如在研的 ELISA抗体检测试剂盒要和已批准上市的 ELISA抗体检测试剂盒进行比较，在研的琼扩抗原要和已批准上市的琼扩抗原进行比较试验。如果没有已批准市的诊断制品，则此项可以不做。比较试验中要从敏感性、特异性、重复性、稳定性等多方质进行对比，最终确定在研试剂盒和上市试剂盒产品的优劣。农业部2335公告明确规定，要严格物行诊断制品注册分类的规定，凡与我国已批准上市销售、检验方法和检测标的物相同的同类诊断制品比较，在敏感性、特异性、稳定性和便捷性等方面无根本改变的诊断制品，不作为新兽药审批。所以，广大研发者在进行诊断制品研制时、更把与批准上市的同类制品进行比较的试验做扎实，确定新研制的诊断制品的优越性，才能确保该诊断制品通过新兽药注册。

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