ELISA实验-IFN-γ检测

九分糖 · 发表于 2024-1-31 10:52:44

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艰难，做细胞IFN-γ释放 ELISA检测，发现同一批的细胞，3个人多次做的检测结果差很大，一个人做11000pg/ml ，一人6000pg/ml，一人几次实验4000~8000不等。。标准品、内控品、试剂盒大家都是一样的，都加了同一批制备好的上清--特定的内控品，结果是接近的。。细胞每次计数要求也是调整至固定密度，单单就是每次细胞刺激剂和细胞添加的问题吗？有没有别的朋友也做过的~

xqliu · 发表于 2024-1-31 18:31:23

差异

小猪吃你 · 发表于 2024-2-1 09:01:47

洗板机or人工洗板？人员操作差异？移液器差异？

小猪佩奇欧欧奇 · 发表于 2024-2-4 13:47:44

操作差异，我们也遇到过

sd2789390 · 发表于 2024-2-5 11:49:48

IFN-γ的确是难做，你可以看下你的回收率，是不是好的，你可以试下用你的标曲的标准品，作为样品，再上次机，看看怎么样

九分糖 · 发表于 2024-2-7 09:48:00

sd2789390 发表于 2024-2-5 11:49
IFN-γ的确是难做，你可以看下你的回收率，是不是好的，你可以试下用你的标曲的标准品，作为样品，再上次机 ...

好的，谢谢，所以我们是怀疑刺激问题，这下一搞那个数据是对的不好说，只能尽量大家靠拢做一致了

九分糖 · 发表于 2024-2-7 09:49:04

小猪佩奇欧欧奇发表于 2024-2-4 13:47
操作差异，我们也遇到过

ok，感谢回答~

九分糖 · 发表于 2024-2-7 09:50:15

小猪吃你发表于 2024-2-1 09:01
洗板机or人工洗板？人员操作差异？移液器差异？

手洗的，试剂盒~一个人自己做2次都差距有点大估计就在人员之间，很多细节可能。

零点昌昌 · 发表于 2024-2-7 10:11:26

你这个实验的误差，可能就是在50%~150%。你试试用内控品作为相对参照换算下，会不会更稳定一些。

小猪吃你 · 发表于 2024-2-7 15:35:31

九分糖发表于 2024-2-7 09:50
手洗的，试剂盒~一个人自己做2次都差距有点大估计就在人员之间，很多细节可能。

操作要培训，试剂盒也可以换一个牌子，上个洗板机

xbwwsq · 发表于 2024-2-26 10:42:42

小猪吃你发表于 2024-2-7 15:35
操作要培训，试剂盒也可以换一个牌子，上个洗板机

请问老师，试剂盒带的洗涤液很少，洗板机用的液体量太大，你们是怎么解决呢

小猪吃你 · 发表于 2024-2-27 13:00:55

xbwwsq 发表于 2024-2-26 10:42
请问老师，试剂盒带的洗涤液很少，洗板机用的液体量太大，你们是怎么解决呢

配点洗涤液呗，就这么解决的啊

hongwei2000 · 发表于 2024-2-27 14:04:08

你可以一级一级排查，先看检测的重复性，再看加标准品的重复性，再看上靶细胞的重复性，再看一个人的日间精密度，再看不同人的；而且考虑各种条件做多次以避免偶然性

xbwwsq · 发表于 2024-2-27 14:11:51

小猪吃你发表于 2024-2-27 13:00
配点洗涤液呗，就这么解决的啊

自己配TBST洗板？不用试剂盒带的洗液会有影响吗

小猪吃你 · 发表于 2024-2-28 12:41:40

xbwwsq 发表于 2024-2-27 14:11
自己配TBST洗板？不用试剂盒带的洗液会有影响吗

有没有影响我说了不算，你们自己测试哈

Ljqm0mmru · 发表于 2024-8-8 09:47:24

你的内控品结果一致ELISA检测方面就没啥问题了，基本上就是细胞刺激问题，这玩意很难把控，同一个人不同时间检测同一批样本都会出现差异，细胞接种多注意细胞混匀和力度

[质量检验] ELISA实验-IFN-γ检测

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