微生物限度-控制菌检查，求答疑

leoo黎 · 发表于 2016-3-15 14:01:18

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15版药典1106 供试品检查

“阳性对照试验方法同供试品的控制菌检查，对照菌的加量应不大于lOOcfu。阳性对照试验应检出相应的控制菌。”其具体操作是直接加不大于100cfu菌到培养基，还是加供试液+不大于100cfu的菌到培养基？求答疑

leehwadong · 发表于 2016-3-16 09:56:07

直接加阳性菌，目的是测培养基灵敏度。供试液+不大于100cfu的菌到培养基目的是测供试液的是否有抑菌作用。

hulugourd · 发表于 2016-3-15 15:02:30

应该是先加菌到供试液中。

leoo黎 · 发表于 2016-3-15 15:15:32

hulugourd 发表于 2016-3-15 15:02
应该是先加菌到供试液中。

因为在写SOP时对这里比较有疑惑，如果阳性对照试验加入的是”菌+供试液“那不是相当于每次都在做适用性检查，那在做供试品检查前规定做的方法适用性试验有什么意义？

hulugourd · 发表于 2016-3-15 15:21:39

应该说做了方法适用性，还做阳性对照有何意义？个人理解是为了降低批与批差异带来的风险。更深层的原因可能是中国制药过程控制/稳定性水平不够？批与批差异较大？你看USP,EP有这样的要求吗？这些只是个人见解，你就当道听途说。

leoo黎 · 发表于 2016-3-15 16:59:14

hulugourd 发表于 2016-3-15 15:21
应该说做了方法适用性，还做阳性对照有何意义？个人理解是为了降低批与批差异带来的风险。更深层的原因可能 ...

这样啊这么说你们阳性对照也是采用“菌夜+供试液”这种操作？因为对药典好多都理解不透，所以在写SOP时感觉都不得要领

cnosema · 发表于 2016-3-16 05:31:27

leoo黎发表于 2016-3-15 01:15
因为在写SOP时对这里比较有疑惑，如果阳性对照试验加入的是”菌+供试液“那不是相当于每次都在做适用性检 ...

应该是菌+供试液，这样可以证明每个批次的产品（供试液）内没有高浓度的抑菌物存在。因为每个批次的产品，抑菌物的浓度，可能会有波动吧。

hulugourd · 发表于 2016-3-16 08:10:03

leoo黎发表于 2016-3-15 16:59
这样啊这么说你们阳性对照也是采用“菌夜+供试液”这种操作？因为对药典好多都理解不透，所以在写SOP时 ...

药典的本意即是如此。多做多思考就懂了。

leoo黎 · 发表于 2016-3-16 08:53:15

hulugourd 发表于 2016-3-16 08:10
药典的本意即是如此。多做多思考就懂了。

主要还是经验不足，那方法适用性试验需要平行重复几次？要用多个批次试验吗？

leoo黎 · 发表于 2016-3-16 09:05:12

cnosema 发表于 2016-3-16 05:31
应该是菌+供试液，这样可以证明每个批次的产品（供试液）内没有高浓度的抑菌物存在。因为每个批次的产品 ...

抑菌物质含量不用测定的吗？

hulugourd · 发表于 2016-3-16 09:31:48

leoo黎发表于 2016-3-16 08:53
主要还是经验不足，那方法适用性试验需要平行重复几次？要用多个批次试验吗？

至少重复三次。如果有多个批次样品则三批最好。

leoo黎 · 发表于 2016-3-16 09:51:03

hulugourd 发表于 2016-3-16 09:31
至少重复三次。如果有多个批次样品则三批最好。

要是用多个批次试验则每个批次都要重复3次？选择多个批次是为了确认方法的耐用性吗？

leoo黎 · 发表于 2016-3-16 10:11:14

leehwadong 发表于 2016-3-16 09:56
直接加阳性菌，目的是测培养基灵敏度。供试液+不大于100cfu的菌到培养基目的是测供试液的是否有抑菌作用。

嗯这样好像合理很多。
再请教一个问题,关于控制菌方法适用性试验。
如大肠埃希菌，在做方法适用性试验应该做到哪一步骤？“选择和分离培养后”是不是阳性组（菌夜）、试验组（供试液+菌夜）的麦康凯琼脂培养基有菌生长，阴性无菌生长，供试品组（供试液）无菌生长，即可？还是要进行一系列的生化试验以验证试验组的菌落是不是大肠？

hulugourd · 发表于 2016-3-16 11:09:00

leoo黎发表于 2016-3-16 09:51
要是用多个批次试验则每个批次都要重复3次？选择多个批次是为了确认方法的耐用性吗？

不需要每个批次重复。选择多个批次的做法不是耐用性。按药典方法进行的实验不需要考察耐用性。

leoo黎 · 发表于 2016-3-16 11:46:10

hulugourd 发表于 2016-3-16 11:09
不需要每个批次重复。选择多个批次的做法不是耐用性。按药典方法进行的实验不需要考察耐用性。

那我还要补两次试验才行，之前是觉得适用性试验只要稍微确认一下就行，惭愧

cnosema · 发表于 2016-3-16 21:37:54

leoo黎发表于 2016-3-15 19:05
抑菌物质含量不用测定的吗？

抑菌物可能是另外加的防腐剂之类的，也可能是供试液本身有抑菌作用。是否需要测定，要看生产规程吧。

leehwadong · 发表于 2016-3-16 22:06:12

leoo黎发表于 2016-3-16 10:11
嗯这样好像合理很多。
再请教一个问题,关于控制菌方法适用性试验。
如大肠埃希菌，在做方法适用性试验 ...

不用进行生化试验证明菌落是大肠杆菌，因为这些试验是在受控制的环境下进行的，有理由相信生长的细菌就是大肠杆菌，当然如果从外观上怀疑，也可以做个革兰氏染色鉴别一下就够了。

leoo黎 · 发表于 2016-3-17 11:07:33

leehwadong 发表于 2016-3-16 22:06
不用进行生化试验证明菌落是大肠杆菌，因为这些试验是在受控制的环境下进行的，有理由相信生长的细菌就是 ...

看到大神的回答让小妹醍醐灌顶，大神在这方面很专业的样子是否可以推荐相关书籍或资料，好让小妹好好补习补习。

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